流式細(xì)胞分(fēn)選是指將組織分散製成細(xì)胞懸液(yè)後(hòu)從中(zhōng)獲(huò)取(qǔ)目的細胞的過程(chéng)。細(xì)胞(bāo)純化(huà)更進一(yī)步強調從原代培養前(qián)成分(fēn)混(hùn)雜的異(yì)質性細胞(bāo)懸液中或者(zhě)從(cóng)培養物(wù)中(zhōng)獲(huò)得(dé)單(dān)一類型(xíng)細胞的過程。通過細胞的分離(lí)和純(chún)化(huà)過(guò)程(chéng),使(shǐ)培養物成(chéng)為單(dān)一類(lèi)型培(péi)養物,甚(shèn)至是遺傳特性*一致(zhì)的(dí)培養物,後者即細胞係(xì)。許多(duō)情(qíng)況(kuàng)下(xià),細(xì)胞(bāo)分(fēn)離和純化並不是(shì)**的,培養(yǎng)物(wù)中(zhōng)隻能(néng)達到以某種細(xì)胞為(wéi)主的(dí)程度(dù),所以(yǐ)也成(chéng)稱為(wéi)富(fù)集。
分離(lí)和(hé)純化細胞的過(guò)程(chéng)不僅僅(jǐn)在原(yuán)代(dài)培(péi)養之前進行(háng)的(dí),有時(shí)分(fēn)離(lí)和純化(huà)細胞(bāo)的過程(chéng)還(huán)貫穿於原(yuán)代培(péi)養和(hé)繼代(dài)培養(yǎng)的過(guò)程中(zhōng),甚(shèn)至是主(zhǔ)要依賴培養(yǎng)過(guò)程實(shí)現分離和純(chún)化細胞的目的。培養物中細(xì)胞成(chéng)分(fēn)是否單(dān)一或者(zhě)目(mù)的細胞(bāo)在(zài)培養物(wù)中(zhōng)的(dí)比例如何,常是(shì)衡量某(mǒu)一培(péi)養工作(zuò)是否成功的重(zhòng)要指標。細胞分離純(chún)化的方(fāng)法有密(mì)度(dù)梯度(dù)離(lí)心(xīn)技術(shù),逆流淘析分離技術,利用細胞表麵(miàn)標誌分(fēn)離純化(huà)細(xì)胞(bāo)的(dí)方法等。
流式細(xì)胞分(fēn)選(xuǎn)抗(kàng)體的常(cháng)規(guī)處(chǔ)理(lǐ)方法:
1,分選外(wài)周血,骨髓時:加抗凝(níng)劑(jì),去紅細胞(bāo);
2,分選組織時,機(jī)械(xiè)分離或膠(jiāo)原酶;
3,培養(yǎng)細(xì)胞(bāo),使(shǐ)用(yòng)胰(yí)酶(méi)消(xiāo)化。
在(zài)實際(jì)細胞分(fēn)離(lí)中(zhōng),因(yīn)為(wéi)流式分(fēn)選(xuǎn)的(dí)辦法價格(gé)相對比較昂貴,實驗者一般(bān)都會(huì)采(cǎi)取別的方(fāng)法(fǎ)分(fēn)離細(xì)胞(bāo)。下(xià)麵(miàn)列(liè)出來(lái)幾種(zhǒng)其它細胞分(fēn)離方法(fǎ)不(bù)能(néng)替(tì)代的情況,這(zhè)些(xiē)情(qíng)況(kuàng)下必(bì)須(xū)進行(háng)流式的(dí)細(xì)胞分選:
1,要(yào)求目標細(xì)胞(bāo)群有*的純度(95%-100%);
2,需(xū)要分離(lí)低密度表麵(miàn)受(shòu)體(tǐ)/抗(kàng)原的(dí)細胞;(弱陽性(xìng)細胞(bāo));
3,需(xū)要根據表麵受體(tǐ)密(mì)度的差(chà)別來分離不(bù)同(tóng)細(xì)胞;(根據(jù)免疫(yì)表型(xíng)的分(fēn)選,抗體(tǐ)親(qīn)和(hé)力進化等(děng));
4,需(xū)要(yào)依據多色(sè)熒光(guāng)標記來(lái)分(fēn)選細胞(bāo);
5,根據(jù)某(mǒu)些細胞(bāo)內(nèi)部標誌,如DNA含量(liáng),胞(bāo)內(nèi)抗原(yuán)等分離細(xì)胞(bāo);
6,多孔板分(fēn)選。如單克(kè)隆(lóng)分選(xuǎn),在96孔板每(měi)個(gè)孔中精(jīng)確(què)的分選進1個細(xì)胞;
7,需(xū)要分選極低(dī)含量(liáng)的(dí)細胞(如(rú)0.001%或更(gēng)低(dī))。流式可以(yǐ)分選出(chū)百(bǎi)萬分之(zhī)一(yī)的稀有細胞(bāo)。