CELLSCRIPT™的使(shǐ)命是(shì)提(tí)供好的(dí)轉錄產品(pǐn)和技術(shù)，用(yòng)於(yú)製(zhì)造(zào)和使用(yòng)RNA以(yǐ)便進行(háng)臨床(chuáng)研究和(hé)治療的細胞翻譯。

目前的產品(pǐn)包括(kuò)多(duō)種體(tǐ)外轉錄(lù)試劑(jì)盒(hé)，加帽類(lèi)似(sì)物(wù)或加(jiā)帽酶(méi)的(dí)5' RNA加帽(mào)試(shì)劑盒(hé)和(hé)3' RNA多聚(jù)腺(xiàn)苷酸化(huà)的(dí)試劑盒(hé)，以及用(yòng)於(yú)轉錄，加(jiā)帽(mào)，poly(A)尾(wěi)mRNA以進行翻譯的多(duō)合一(yī)試劑(jì)盒。

其(qí)中，ScriptCap™ Cap 1 Capping System（C-SCCS1710）包含(hán)ScriptCap加(jiā)帽酶，ScriptCap 2'-O-甲(jiǎ)基(jī)轉移(yí)酶(méi)，GTP和(hé)SAM等成(chéng)分(fēn)，對體外(wài)轉錄的(dí)RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄後加(jiā)帽修飾(shì)。Cap 0或Cap 1上限(xiàn)均可(kě)構建(jiàn)，效(xiào)率接(jiē)近(jìn)100%（這不(bù)能通過共轉錄加(jiā)帽方法來(lái)完(wán)成）。

ScriptCap加(jiā)帽酶(méi)在體外催化(huà)具(jù)有5‘-三磷酸(suān)基的初(chū)級RNA的5’末端(duān)加成(chéng)帽核苷酸。“帽(mào)核苷酸"或“帽"是一(yī)種鳥(niǎo)嘌呤(líng)核(hé)苷，它(tā)通過(guò)5‘C連(lián)接(jiē)到(dào)一個三(sān)磷酸基團，然後(hòu)再連(lián)接到初級(jí)mRNA轉錄(lù)本(běn)中最(zuì)多的5’核苷酸的5‘碳上，在(zài)大(dà)多數(shù)真核生物(wù)中(zhōng)，帽核苷(gān)酸中鳥嘌(piāo)呤(líng)7位的氮是甲(jiǎ)基化的。表示為：m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3')。其中m7G代表N7-甲基鳥嘌呤核苷，PPP代(dài)表(biǎo)帽子(zǐ)核苷的5’碳(tàn)與初級RNA轉錄(lù)本(běn)的(dí)第(dì)一個(gè)核苷酸(suān)之間的三(sān)磷(lín)酸橋(qiáo)，N1(PN)x-OH(3’)代(dài)表初級(jí)RNA轉錄本，其(qí)中(zhōng)N1是(shì)最多(duō)的(dí)5’核(hé)苷酸(suān)。

ScriptCap加(jiā)帽酶(méi)可(kě)依次(cì)催化三種不同的(dí)酶(méi)反(fǎn)應：

(1) RNA三(sān)磷(lín)酸酶將(jiāng)RNA的5‘三磷(lín)酸裂解(jiě)成二(èr)磷酸(suān)：

pppN1(p)Nx-OH(3')——ppN1(pN)x-OH(3') + Pi

(2) RNA鳥苷(gān)酸轉移(yí)酶(méi)將GTP連(lián)接(jiē)到RNA最5‘核苷酸(suān)(N1)的5’二(èr)磷(lín)酸上：

ppN1(pN)x-OH(3') + GTP——G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') + PPi

(3) 鳥嘌呤(líng)-7-甲基轉移酶以S-腺(xiàn)苷(gān)甲硫氨酸(SAM或ADOMet)為(wéi)輔(fǔ)因(yīn)子，催化帽(mào)核(hé)苷酸(suān)中(zhōng)鳥(niǎo)嘌(piāo)呤(líng)7-氮(dàn)的(dí)甲基(jī)化：

G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') + AdoMet——m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') + AdoHyc

這一(yī)過程被稱為“蓋帽"，與(yǔ)未蓋帽(mào)的RNA相比，它提高了(liǎo)RNA的穩定(dìng)性和翻譯(yì)效率。ScriptCap蓋帽酶構(gòu)建(jiàn)的封端RNA產物具有(yǒu)“0"帽(mào)結構(gòu)。在體(tǐ)外，通(tōng)過同時使(shǐ)用ScriptCap 2‘-O-甲(jiǎ)基(jī)轉移(yí)酶(méi)和ScriptCap蓋帽酶(méi)，可以(yǐ)將(jiāng)CAP0 RNA轉化為“CAP1"結(jié)構。

ScriptCap 2‘-O-甲(jiǎ)基轉(zhuǎn)移酶通過將(jiāng)供(gōng)體分(fēn)子SAM上(shàng)的(dí)甲基(jī)轉移到CAP 0 RNA倒數(shù)第(dì)二(èr)個核苷(gān)酸(suān)的2’-O位(wèi)，從CAP 0-RNA製(zhì)備CAP1-RNA，合成(chéng)具有(yǒu)CAP 1結(jié)構的(dí)RNA。

Cap1 RNA可(kě)以進(jìn)一(yī)步(bù)提高mRNA的(dí)體(tǐ)內翻譯效(xiào)率(shuài)，並有助(zhù)於(yú)將mRNA標(biāo)記為(wéi)相對(duì)於細胞(bāo)內(nèi)免疫監視機製的(dí)“自身RNA"。

ScriptCap1蓋(gài)帽(mào)係統提供了一種(zhǒng)在IVT反應中通過共(gòng)轉錄(lù)蓋帽來製(zhì)造(zào)蓋帽RNA的替代方案，在(zài)IVT反應中，用(yòng)二核苷(gān)酸蓋帽(mào)類似(sì)物(wù)(例如m7GpppG)代替部(bù)分GTP，如果(guǒ)RNA的(dí)5‘末端(duān)不是結構化(huà)的，使(shǐ)用ScriptCap 1蓋帽(mào)係(xì)統(tǒng)的(dí)蓋帽效(xiào)率可以接(jiē)近100%。相反，由於CAP類似(sì)物與GTP競(jìng)爭RNA聚合酶的轉錄啟動，共轉錄的蓋(gài)帽效率(shuài)受(shòu)到CAP類(lèi)似物的濃度及(jí)其(qí)與GTP濃(nóng)度(dù)之比的限(xiàn)製(zhì)。因(yīn)此(cǐ)，在(zài)轉(zhuǎn)錄(lù)反(fǎn)應(yīng)中(zhōng)使用CAP類似(sì)物蓋帽的RNA百分(fēn)比(bǐ)總是小(xiǎo)於100%。在使用CAP類似物(wù)的(dí)共轉錄蓋帽反應中可以(yǐ)產生的(dí)CAP RNA的量(liáng)也受(shòu)到(dào)降(jiàng)低GTP濃度以允(yǔn)許(xǔ)CAP類(lèi)似(sì)物競爭(zhēng)轉錄起(qǐ)始的需(xū)要的(dí)限(xiàn)製。另(lìng)一方麵，如(rú)果要蓋帽的RNA具(jù)有高(gāo)度結(jié)構的5‘末端，則與CAP類(lèi)似物共(gòng)轉錄蓋帽(mào)可能是有益(yì)的(dí)。

優(yōu)勢(shì)：靈活(huó)進行cap0和(hé)cap1的加帽(mào)；效(xiào)率JI高，接近100％；同(tóng)類產品可直接交叉(chā)使(shǐ)用以(yǐ)及價格合適。

應(yīng)用(yòng)：進行(háng)體(tǐ)外(wài)mRNA的修飾(shì)，用作體(tǐ)外蛋(dàn)白表(biǎo)達係統和(hé)生(shēng)理試(shì)驗；前(qián)體mRNA的研究試驗以及(jí)疫(yì)苗(miáo)研究。