羧基(jī)活化(huà)的磁性(xìng)瓊(qióng)脂(zhī)糖可用於製備磁性(xìng)層析(xī)介質。它(tā)與(yǔ)含有伯(bó)胺基團的配(pèi)體(tǐ)形(xíng)成(chéng)化(huà)學穩定(dìng)的酰胺鍵，它有一(yī)個長間隔區（9個(gè)原子(zǐ)）。目(mù)標分子(zǐ)結合後，磁性樹脂(zhī)可以(yǐ)很(hěn)容(róng)易地(dì)在磁鐵的幫助下(xià)從生物原料中分(fēn)離出來。

羧基活(huó)化(huà)瓊脂(zhī)糖(táng)可(kě)用(yòng)於(yú)固定(dìng)含胺分(fēn)子。耦合(hé)化學是基於碳二亞(yà)胺的，是一項(xiàng)成功且(qiě)有據(jù)可查(chá)的技(jì)術(shù)。

1. 屬(shǔ)性

由(yóu)高度交(jiāo)聯(lián)的4%磁性瓊脂(zhī)糖製(zhì)成(chéng)。它可以(yǐ)在更嚴(yán)苛的條(tiáo)件下(xià)進行操作(zuò)使用(yòng)，因(yīn)此可以應用於(yú)低pH值和(hé)某些高濃(nóng)度(dù)有機(jī)溶劑(jì)。

由(yóu)於(yú)瓊脂(zhī)糖具有(yǒu)出色的親水(shuǐ)性(xìng)和低(dī)非特異性結合(hé)特性，長(cháng)期(qī)以來一直(zhí)用(yòng)於色(sè)譜分離。這(zhè)些顆(kē)粒(lì)具(jù)有開(kāi)孔結(jié)構，對大(dà)蛋白(bái)質分子(zǐ)具有(yǒu)出色的傳質性(xìng)能(néng)。

通過將(jiāng)長(cháng)的親(qīn)水(shuǐ)性(xìng)間隔臂(bì)連接到骨架上(shàng)來(lái)活化基礎基質。它(tā)直接(jiē)與分(fēn)子中的伯胺基(jī)反(fǎn)應(yīng)，在(zài)碳二亞胺試(shì)劑(jì)存在下被固定。以(yǐ)20%乙(yǐ)醇(chún)中的水(shuǐ)懸浮(fú)液形(xíng)式提供。

表1  Carboxyl-activated SepFast MAG 4HF的特性

*可(kě)應要求提供其他粒徑(jìng)

2. 配(pèi)體固(gù)定(dìng)化(huà)

以下是配(pèi)體(tǐ)一(yī)般的偶(ǒu)聯流程。

2.1  將(jiāng)目標(biāo)配體溶解在(zài)偶聯緩衝(chōng)液中，將pH值調整(zhěng)為4.5。偶聯(lián)緩衝液(yè)的體積可以是(shì)固(gù)定凝(níng)膠(jiāo)體積的一半(bàn)或(huò)相同。

2.2  在(zài)過濾(lǜ)裝置(zhì)中(zhōng)用(yòng)至少(shǎo)5 倍體(tǐ)積(jī)的(dí)偶聯(lián)緩衝液(yè)清洗羧基活(huó)化凝(níng)膠。

2.3  將洗淨(jìng)並(bìng)吸幹(gān)的凝(níng)膠（來自步(bù)驟(zhòu) 2.2）轉(zhuǎn)移到步驟(zhòu)2.1 製備(bèi)的(dí)溶液中。

2.4  將碳二(èr)亞(yà)胺作(zuò)為(wéi)幹(gān)粉或預先溶解的溶液添(tiān)加(jiā)到漿液中(zhōng)至終(zhōng)濃度(dù)為(wéi)0.1 M。如(rú)果碳二(èr)亞胺(àn)預先溶解在水中，則將(jiāng)pH值調整為(wéi)4.5。

2.5  在室(shì)溫(wēn)或4-8℃下(xià)混合(hé)漿料(liào)。

2.6   在第1個(gè)小時(shí)內通過(guò)添加 0.1  M NaOH調(tiáo)節(jié)反應(yīng)pH值(zhí)至(zhì)4.5。

2.7 將偶聯(lián)反(fǎn)應放置(zhì)2-24小時(shí)。

2.8 用5倍(bèi)體積的0.1 M 醋(cù)酸(suān)鹽緩衝液 + 0.5 M NaCl，pH 4.0洗(xǐ)滌凝膠(jiāo)，然後用(yòng)5倍(bèi)體(tǐ)積(jī)的0.1 M Tris/HCl + 0.5 M NaCl，pH 8.0洗(xǐ)滌(dí)凝(níng)膠(jiāo)。重復(fù)上(shàng)述洗滌2次(cì)以上。

2.9 使(shǐ)用前(qián)用(yòng)工作/平(píng)衡(héng)緩衝液清(qīng)洗(xǐ)凝膠。

3. 固(gù)定化效率(shuài)的一般(bān)考(kǎo)慮

3.1 pH

偶聯反(fǎn)應在pH 4.5 - 7.5之間(jiān)非常有效地進(jìn)行(háng)。但是可以優(yōu)化(huà)偶(ǒu)聯(lián)pH以(yǐ)獲(huò)得(dé)最佳(jiā)結果(guǒ)（例(lì)如(rú)，高偶聯產(chǎn)率(shuài)和高(gāo)配體活性(xìng)）。

在偶聯(lián)反(fǎn)應的第1個小時內，pH值會降低。要(yào)記(jì)得通(tōng)過添(tiān)加0.1 M NaOH來(lái)調(tiáo)節偶聯pH值。之(zhī)後(hòu)pH值(zhí)會(huì)趨於穩定。

3.2 偶聯(lián)方案

去離子水可(kě)直(zhí)接(jiē)用作偶聯(lián)溶(róng)液(yè)。應(yīng)避(bì)免使用含有(yǒu)氨基
，巰基(jī)或羧基的緩衝溶液，因(yīn)為它(tā)們會(huì)與配(pèi)體偶(ǒu)聯(lián)發(fā)生(shēng)競爭。

可(kě)以引(yǐn)入稀(xī)釋的某些(xiē)有(yǒu)機溶劑以(yǐ)提(tí)高配體的溶(róng)解度。應事先測(cè)試此類溶劑(jì)的適(shì)用性(xìng)。

3.3 碳二亞(yà)胺(àn)的選擇

應(yīng)使(shǐ)用水溶(róng)性碳(tàn)二亞(yà)胺，例如1‑乙(yǐ)基(jī)‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亞(yà)胺  (EDC)  或1‑環(huán)己(jǐ)基(jī)‑3‑(2‑嗎啉代(dài)乙(yǐ)基(jī)) 碳二亞(yà)胺  (CMC)（通常(cháng)合成(chéng)為 metho‑p‑甲(jiǎ)苯磺酸鹽）。EDC是常(cháng)用(yòng)的(dí)碳二亞胺試(shì)劑。

3.4 碳(tàn)二亞胺(àn)的(dí)濃(nóng)度

添加的碳(tàn)二(èr)亞胺的(dí)量應(yīng)以化學計量的方式超過(guò)活(huó)化的羧基。建(jiàn)議以(yǐ)最(zuì)終(zhōng)反(fǎn)應漿料中(zhōng)的(dí)0.1  M作為(wéi)起(qǐ)點(diǎn)。

3.5 反(fǎn)應時間和溫度(dù)

可(kě)以(yǐ)優化偶(ǒu)聯(lián)過程(chéng)中配體和活化介質之間(jiān)的(dí)接觸時間以(yǐ)保持(chí)配(pèi)體(tǐ)的(dí)生(shēng)物(wù)活性。

典型(xíng)的反(fǎn)應(yīng)時(shí)間(jiān)是(shì)在(zài)室(shì)溫或(huò)冷藏(cáng)室中(zhōng)過夜。

3.6 屏蔽(bì)剩餘(yú)的活化(huà)配體

如(rú)果加(jiā)入(rù)過量的(dí)配(pèi)體，則可能不需要封(fēng)閉殘(cán)留的活化(huà)基團。

未(wèi)與配體(tǐ)反(fǎn)應(yīng)的(dí)活(huó)化基(jī)團應(yīng)在(zài)碳二亞(yà)胺(àn)存(cún)在下(xià)通過(guò)添(tiān)加額(é)外的含(hán)有pH 8 - 9伯(bó)胺的(dí)小分(fēn)子(zǐ)（例如1 M乙(yǐ)醇(chún)胺(àn)）來封(fēng)端(duān)。

3.7 最終(zhōng)介(jiè)質的(dí)洗(xǐ)滌

偶聯(lián)反(fǎn)應(yīng)後(hòu)需(xū)要將(jiāng)未連(lián)接(jiē)或(huò)弱連接的(dí)配(pèi)體WAN全洗掉。采(cǎi)用高pH值和(hé)低(dī)pH值(zhí)交替的(dí)洗滌(dí)方(fāng)法(fǎ)可以(yǐ)確保有(yǒu)效(xiào)去除(chú)不(bù)需要的(dí)物(wù)質。

4. 固定化親(qīn)和介質的使(shǐ)用(yòng)

配(pèi)體(tǐ)偶聯介質(zhì)可用(yòng)於使用(yòng)間歇攪拌罐模式(shì)或填充(chōng)柱模式的(dí)純(chún)化。處理這(zhè)種材(cái)料遵(zūn)循與(yǔ)處理其他基於(yú)瓊(qióng)脂(zhī)糖基質相同(tóng)的(dí)原(yuán)則。

5. 儲存

應在8℃下儲存。偶聯的濕(shī)介質應(yīng)在防菌(jūn)劑(jì)（例(lì)如20%乙(yǐ)醇(chún)）存在的情(qíng)況(kuàng)下於(yú)4-8℃儲(chǔ)存(cún)。切勿(wù)凍存(cún)耦合介(jiè)質。

6. 更多(duō)信(xìn)息

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7. 訂(dìng)購(gòu)信息