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更新時間(jiān):2023-05-08
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親和層析填(tián)料是(shì)根據生物分(fēn)子間親和力具(jù)有專一性而設計(jì)的層(céng)析技(jì)術(shù),是生物(wù)大(dà)分(fēn)子的(dí)生物學(xué)特異性,這種專一性的親和(hé)力(lì)體現(xiàn)在,如(rú)激素和(hé)受體(tǐ),抗原和抗(kàng)體,酶(méi)蛋白和輔酶,酶和(hé)酶抑(yì)製劑(或配體)等(děng)。以抗原和(hé)抗(kàng)體為(wéi)例,在一定條件(jiàn)下(xià),抗原(yuán)抗(kàng)體能緊(jǐn)密(mì)地(dì)結合在(zài)一起(qǐ)形成復合(hé)物(wù)。若將(jiāng)復(fù)合(hé)物(wù)的一方固定在(zài)不溶性(xìng)載(zǎi)體(tǐ)上(shàng),則(zé)可從溶(róng)液(yè)中專一地(dì)分離(lí)和(hé)提(tí)純(chún)另(lìng)一方。與(yǔ)其(qí)他純化方法相比(bǐ),親(qīn)和層(céng)析的(dí)純(chún)化作用強(qiáng),效果好(hǎo),最重(zhòng)要的是(shì),純(chún)化(huà)速度快(kuài),有時(shí)僅(jǐn)一(yī)步即可達到純化的(dí)目的。
親(qīn)和(hé)層析填料(liào)具有三大(dà)優(yōu)點:
1.純化步驟(zhòu)少(shǎo),純(chún)化(huà)純度高。親和層(céng)析填料是(shì)一(yī)種極為有效(xiào)的(dí)分離蛋(dàn)白(bái)質的(dí)方法,通常(cháng)情(qíng)況下(xià),一步法即可達(dá)到(dào)純化的目的,更為(wéi)關鍵的是(shì),純化(huà)的(dí)純(chún)度(dù)高。
2.對(duì)不穩(wěn)定(dìng)蛋(dàn)白(bái)純(chún)化(huà)更有利。親和(hé)層析填(tián)料(liào)能有效(xiào)的進(jìn)行(háng)物質純(chún)化,對生物分子(zǐ)吸(xī)附和分離具(jù)有選(xuǎn)擇(zé)性,純化(huà)倍數高。同(tóng)時,在純化(huà)過程中(zhōng),蛋(dàn)白(bái)得到濃縮,結合到親(qīn)和(hé)配(pèi)基後,性(xìng)質更穩(wěn)定,活(huó)性回收(shōu)率更高,純化步驟(zhòu)更(gēng)少(shǎo),純(chún)化時間更短,對不穩定蛋白(bái)的(dí)純(chún)化(huà)更(gēng)有(yǒu)利。
3.分(fēn)離效果(guǒ)優(yōu)良(較大容(róng)量載體(tǐ)同樣)。除特異(yì)性的(dí)吸附(fù)外,仍然(rán)會因(yīn)分(fēn)子(zǐ)的錯(cuò)誤認別(bié)和分(fēn)子(zǐ)間非選擇(zé)性的作用力而(ér)吸(xī)附(fù)一(yī)些(xiē)雜蛋(dàn)白質,另(lìng)外在洗(xǐ)脫(tuō)過(guò)程中,配體(tǐ)不可避免的脫落進入(rù)分(fēn)離體(tǐ)係(xì)。親(qīn)和(hé)層析(xī)填料(liào)正確地選(xuǎn)擇(zé)合適的(dí)配(pèi)體和(hé)結合(hé)方式,對獲(huò)得具有(yǒu)優(yōu)良分(fēn)離效(xiào)果和較大(dà)容量的載(zǎi)體(tǐ)同樣具有(yǒu)重(zhòng)要作用。能與(yǔ)分離(lí)物質牢固(gù),特(tè)異和(hé)可逆(nì)結(jié)合的物(wù)質(zhì)都(dū)可以作為配體。選(xuǎn)擇配體有兩個(gè)條件:第(dì)一(yī)是(shì)生物大分子(zǐ)與配體間具(jù)有合(hé)適(shì)的親和力(lì),親和力(lì)太強(qiáng),洗(xǐ)脫(tuō)條件劇烈(liè),易造成生物大分子(zǐ)失活(huó),親和(hé)力太(tài)小(xiǎo),解離容易,結合(hé)率不(bù)高。第二(èr)是(shì)配(pèi)體(tǐ)要具有(yǒu)雙重(zhòng)功能,既有可牢固(gù)與載體結(jié)合的基(jī)團,結合後又不影響生物(wù)大分子與配(pèi)體(tǐ)間的親(qīn)和力。
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