polyplus轉染(rǎn)試劑(jì) jetPRIME®產(chǎn)品說(shuō)明書

更新時間(jiān)：2023-06-28

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polyplus轉(zhuǎn)染試(shì)劑(jì) jetPRIME®產(chǎn)品(pǐn)說(shuō)明(míng)書(shū)

該(gāi)以DNA轉(zhuǎn)染為例來(lái)進行說明：

第0天(tiān)：細(xì)胞接(jiē)種(zhǒng)

→根據下(xià)表(biǎo)在V mL細胞生(shēng)長培(péi)養基中接(jiē)種(zhǒng)細胞（每個(gè)孔(kǒng)，盤子或(huò)燒瓶的(dí)數量）

培(péi)養皿	細胞數量	V=轉(zhuǎn)染(rǎn)過程中培養(yǎng)基(jī)的體積(jī)
96孔板	7500 - 10 000	0.1 mL
24孔板	50 000 - 80 000	0.5 mL
12孔板(bǎn)	80 000 - 150 000	1 mL
6孔(kǒng)板(bǎn)/35mm	150 000 - 250 000	2 mL
100 mm/燒(shāo)瓶 75 cm²	1 x 10⁶ - 2 x 10⁶	10 mL

*備注(zhù)：對於特定(dìng)的細(xì)胞(bāo)類型或(huò)懸浮(fú)細胞(bāo)，請(qǐng)參考(kǎo)完(wán)整的方(fāng)案。

第1天：轉染

→在(zài)血清存在(zài)的情況下(xià)進行(háng)轉染

→僅使(shǐ)用jetPRIME®緩(huǎn)衝液(yè)

→以60-80%融合率(shuài)轉染(rǎn)細胞

培養(yǎng)皿	W=jetPRIME®緩(huǎn)衝液的體(tǐ)積(jī)	X=添(tiān)加的(dí)DNA量(liáng)	Y=jetPRIME®試(shì)劑的(dí)體(tǐ)積
96孔板	10 µL	0.1 µg	0.2 µL
24孔板	50 µL	0.5 µg	1 µL
12孔(kǒng)板(bǎn)	75 µL	0.8 µg	1.6 µL
6孔板(bǎn)/35mm	200 µL	2 µg	4 µL
100 mm/燒瓶 75 cm²	500 µL	10 µg	20 µL

第2-3天(tiān)：測量(liáng)基(jī)因表(biǎo)達

√ Protocol優化(huà)：

測(cè)試不(bù)同(tóng)的(dí)DNA量(liáng)：X，0.5X和(hé)1.5X；

測(cè)試不同的DNA/jetPRIME®比例(lì)，1:2至1:3；

有關(guān)細(xì)胞特異性(xìng)Protocol，請(qǐng)聯(lián)係(xì)益(yì)元利(lì)康(kāng)客(kè)服(fú)獲(huò)取相關信息(xī)。

培養(yǎng)皿	W=jetPRIME®緩衝液的體積(jī)	X=添加的DNA量	Y=jetPRIME®試(shì)劑的體積
96孔板(bǎn)	10 µL	0.05-0.20 µg	0.10-0.60 µL
24孔板(bǎn)	50 µL	0.25-0.75 µg	0.50-2.25 µL
12孔板	75 µL	0.4-1.2 µg	0.8-3.6 µL
6孔板/35mm	200 µL	1-3 µg	2-9 µL
100 mm/燒瓶(píng) 75 cm²	500 µL	5-15 µg	10-45 µL

備(bèi)注：對於HEK-293和HeLa細(xì)胞(bāo)，可以將DNA量減(jiǎn)少到0.5X，並(bìng)使(shǐ)用1:2 DNA/jetPRIME®比(bǐ)例(lì)。

√ 提高敏(mǐn)感細(xì)胞(bāo)細胞(bāo)活力的(dí)提(tí)示(shì)：

轉染後(hòu)4小(xiǎo)時(shí)更換(huàn)培(péi)養基(jī)；

將DNA量(liáng)減少到(dào)0.5倍，同(tóng)時保持(chí)之前(qián)使(shǐ)用的(dí)DNA/jetPRIME®比例；

在較早的(dí)時間點（例如(rú)轉(zhuǎn)染(rǎn)後24小(xiǎo)時而(ér)不是48小時）分(fēn)析(xī)轉染(rǎn)；

檢查(chá)靶基因是否(fǒu)影(yǐng)響細胞(bāo)活力(lì)。

√ 良好(hǎo)的DNA轉(zhuǎn)染(rǎn)實(shí)例：

適當(dāng)儲(chǔ)存jetPRIME®（5±3°C）；

確保細(xì)胞(bāo)在(zài)轉染(rǎn)前(qián)已傳代(dài)兩次以(yǐ)上(shàng)且少於(yú)20次(cì)；

丟(diū)棄過度(dù)分化的細(xì)胞(bāo)；

定(dìng)期檢(jiǎn)查支原體汙染情況(kuàng)；

使用報告基(jī)因來建立和優(yōu)化轉染(rǎn)條(tiáo)件(jiàn)；

血(xiě)清(qīng)質(zhì)量可能(néng)嚴重影響轉染效率(shuài)，購(gòu)買新一批(pī)血(xiě)清時(shí)或胰(yí)蛋(dàn)白酶檢查(chá)細胞(bāo)活(huó)力(lì)以及(jí)轉染(rǎn)效(xiào)率(shuài)。

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