你知道該如(rú)何(hé)製備蛋(dàn)白質電泳凝膠嗎？讓我(wǒ)們一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看吧(bā)！

一
，製備方法

1. 根據(jù)垂直電泳槽(cáo)說明(míng)書安裝(zhuāng)玻璃(lí)板(bǎn)，確定(dìng)需(xū)配製分離膠(jiāo)的濃度(dù)和(hé)體(tǐ)積(jī)，配(pèi)製所(suǒ)需分(fēn)離膠；

2. 迅速將分(fēn)離膠注入兩玻璃(lí)板間(jiān)隙中(zhōng)，留(liú)出(chū)灌注積(jī)層(céng)膠所需(xū)空(kōng)間(jiān)（梳子(zǐ)的(dí)齒長再加(jiā)1cm，用滴(dī)管小(xiǎo)心地在(zài)分(fēn)離膠上覆蓋(gài)一層(céng)0.1% SDS（當丙烯酰胺(àn)濃度≤8%時）或異(yì)丁醇(chún)或水（當(dāng)丙(bǐng)烯(xī)酰胺濃度≥10%時），覆蓋層可防止氧(yǎng)擴散(sàn)進入(rù)凝膠而(ér)抑製聚(jù)合(hé)反應。將凝(níng)膠(jiāo)垂直置於(yú)室溫下(xià)；

3. 分離膠(jiāo)聚(jù)合(hé)wan全後，倒(dǎo)出覆(fù)蓋(gài)層液(yè)體，用去(qù)離(lí)子水洗滌凝膠(jiāo)頂部數次(cì)以(yǐ)除去未聚(jù)合(hé)的丙烯酰(xiān)胺，盡可能排(pái)除凝膠上(shàng)的(dí)液體；

4. 確定需配(pèi)製(zhì)濃(nóng)縮(suō)膠(jiāo)的(dí)體積(jī)，配製(zhì)所需濃縮膠，然後(hòu)直(zhí)接(jiē)將濃縮膠灌(guàn)注(zhù)在分離(lí)膠上，立(lì)即插(chā)入幹(gān)淨(jìng)的(dí)配套(tào)梳(shū)子，避(bì)免氣泡，然後(hòu)加入(rù)濃縮膠溶液以(yǐ)充(chōng)滿梳子(zǐ)之(zhī)間(jiān)的(dí)空隙。待濃縮膠聚合(hé)後(hòu)，拔(bá)出(chū)梳(shū)子，形成(chéng)加(jiā)樣孔；

5. 用去離子水(shuǐ)將電泳(yǒng)緩衝液貯存(cún)液(yè)稀(xī)釋(shì)5倍，倒入(rù)電(diàn)泳(yǒng)槽，將加(jiā)樣孔充(chōng)滿(mǎn)，這時(shí)加(jiā)樣孔中的(dí)氣泡(pào)可(kě)通過電(diàn)泳(yǒng)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)排(pái)除。

二
，常見(jiàn)問題

1. 濃(nóng)縮(suō)效應：樣品在(zài)開始電泳時(shí)，通(tōng)過濃縮膠濃縮(suō)成高濃度(dù)的(dí)樣(yàng)品(pǐn)薄層(céng)；

2. 電荷(hé)效應(yīng)：在(zài)均一(yī)電勢(shì)梯(tī)度和PH的(dí)分離膠中，由於(yú)各(gè)蛋(dàn)白質(zhì)的等電點(diǎn)不同所帶(dài)電荷量不同(tóng)，在電(diàn)場中(zhōng)所受到的(dí)引力(lì)不(bù)同，經(jīng)過一(yī)段時間的電泳(yǒng)，各(gè)種蛋白質(zhì)就(jiù)以一定順(shùn)序排(pái)列(liè)成一條條蛋白質區(qū)帶；

3. 有分(fēn)離(lí)膠孔(kǒng)徑較(jiào)小，分(fēn)子(zǐ)量大小(xiǎo)和(hé)分子(zǐ)形(xíng)狀(zhuàng)不同的蛋白質(zhì)通過(guò)分離膠後(hòu)，所(suǒ)受的阻(zǔ)滯程度(dù)不同(tóng)，因而(ér)遷移率(shuài)不同而(ér)被(bèi)分(fēn)離(lí)。

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