相(xiāng)當(dāng)多的(dí)蛋白質(zhì)行(háng)使功(gōng)能(néng)的時(shí)候並不(bù)是(shì)單打獨鬥的(dí)，蛋白(bái)質們通(tōng)過蛋白質相互(hù)作(zuò)用(yòng)形成復合體然後進(jìn)行(háng)工(gōng)作。因此(cǐ)，研究蛋白質的相互作用(yòng)成為(wéi)研(yán)究(jiū)蛋(dàn)白(bái)質(zhì)功(gōng)能和作用機製的最為(wéi)重要(yào)的環節之(zhī)一(yī)。那(nà)麼你知(zhī)道(dào)研(yán)究(jiū)蛋白質相(xiāng)互作(zuò)用(yòng)的(dí)方(fāng)法有哪些嗎？讓(ràng)我(wǒ)們一(yī)起來看(kàn)看吧(bā)！

一(yī)，酵母(mǔ)雙(shuāng)雜交係統

原理：很(hěn)多(duō)真核(hé)生物的位點特異(yì)轉錄(lù)激活(huó)因(yīn)子通常具(jù)有兩個(gè)可(kě)分割(gē)開(kāi)的結(jié)構域，即(jí)DNA特(tè)異(yì)結合(hé)域（DNA-binding domain, BD）與(yǔ)轉錄激活(huó)域（Transcriptional activationdomain, AD）。這(zhè)兩個(gè)結構域(yù)各具(jù)功能，互不(bù)影(yǐng)響，但一個完整(zhěng)的激(jī)活特(tè)定基(jī)因表(biǎo)達(dá)的(dí)激活因(yīn)子必(bì)須同(tóng)時(shí)含有(yǒu)這兩(liǎng)個結(jié)構(gòu)域，否則(zé)無(wú)法(fǎ)完成激活功(gōng)能(néng)。

將兩待(dài)測研究蛋(dàn)白(bái)（蛋(dàn)白X與(yǔ)蛋白Y）分別與(yǔ)BD，AD結(jié)構(gòu)域(yù)構(gòu)建融(róng)合(hé)質(zhì)粒。將構建好(hǎo)的兩個質粒轉(zhuǎn)入同一酵(jiào)母(mǔ)細胞(bāo)中表達，如果(guǒ)兩(liǎng)蛋白之(zhī)間不存在相互作用(yòng)，則下遊(yóu)基因(yīn)（報(bào)告基因(yīn)）不會轉錄表達；如(rú)果兩個(gè)蛋(dàn)白(bái)存在(zài)相互作用，則BD與AD兩(liǎng)結構(gòu)域空間上很接(jiē)近，從(cóng)而下遊基因(yīn)（報告基因）得(dé)到轉(zhuǎn)錄(lù)。判斷通過報(bào)告(gào)基因表達與否(fǒu)，即可判斷(duàn)兩蛋(dàn)白(bái)之(zhī)間是否存在(zài)相互作(zuò)用。

用酵(jiào)母雙(shuāng)雜交係統能夠(gòu)快(kuài)速，直(zhí)接分(fēn)析已知(zhī)蛋白之(zhī)間的相互作用(yòng)，並(bìng)能(néng)尋找，分離與(yǔ)已(yǐ)知蛋白相互(hù)作用(yòng)的配體，在研究(jiū)抗原和(hé)抗體相(xiāng)互(hù)作用，發現新的(dí)蛋白質和發現蛋(dàn)白質的(dí)新功(gōng)能，篩選藥物作用(yòng)位點及藥(yào)物對(duì)蛋白互作影(yǐng)響(xiǎng)，建立基(jī)因(yīn)組蛋白連(lián)鎖圖等方(fāng)麵(miàn)應(yīng)用(yòng)廣泛。

二，免疫共(gòng)沉(chén)澱(diàn)

免疫共沉澱（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種以(yǐ)抗(kàng)體(tǐ)和抗原之間(jiān)的專一(yī)性作用為基(jī)礎的用於研究兩個(gè)蛋白相互(hù)作(zuò)用的(dí)經(jīng)典方法。

原理：基(jī)於抗體(tǐ)與(yǔ)抗(kàng)原(yuán)（靶(bǎ)蛋白）之間(jiān)的特異性結合，此時(shí)如果樣品(pǐn)溶(róng)液(yè)中(zhōng)存(cún)在能與(yǔ)靶(bǎ)蛋白(bái)相互(hù)作用的(dí)目的蛋白，會(huì)一同(tóng)被拉(lā)下(xià)來，隨(suí)後利用(yòng)SDS-PAGE，Western Blot等方法對得(dé)到的目標蛋(dàn)白(bái)進(jìn)行分析(xī)，進(jìn)而證明兩者間的相互(hù)作用。

三，免疫熒光共定位

將(jiāng)免(miǎn)疫(yì)學方(fāng)法(抗原抗(kàng)體特異(yì)結(jié)合)與(yǔ)熒光(guāng)標記技(jì)術結合(hé)起來(lái)研(yán)究(jiū)特異蛋白抗原在細胞內分布的(dí)方(fāng)法。一(yī)般用來驗證2種或3種蛋(dàn)白(bái)是否存(cún)在(zài)共(gòng)定(dìng)位(wèi)關係。

由於熒光素所發(fā)的熒(yíng)光(guāng)可在熒光(guāng)顯(xiǎn)微鏡下(xià)檢出，從(cóng)而(ér)可對抗原(yuán)進行細(xì)胞(bāo)定位(wèi)。兩種(zhǒng)不同的(dí)蛋白使用不同屬(shǔ)性(xìng)的不同顏色(sè)熒光(guāng)標記(jì)後，通過(guò)觀察顏色的變化確定(dìng)是否有共定位，也可(kě)以(yǐ)使(shǐ)用(yòng)軟件進行分(fēn)析。

該(gāi)技術的(dí)主(zhǔ)要特點是(shì)：特異(yì)性強(qiáng)，敏感性高，速度(dù)快(kuài)。主(zhǔ)要缺(quē)點是：非特異(yì)性染色問題尚未(wèi)完(wán)quan解決，結(jié)果判定的客觀性不(bù)足，技(jì)術(shù)程序(xù)也還比(bǐ)較復(fù)雜(zá)。

四，Pull-down實(shí)驗(yàn)

Pull-down實驗(yàn)，又稱拉(lā)下(xià)實(shí)驗，是一種體外親和(hé)純化(huà)技術。（這(zhè)個實(shí)驗(yàn)跟免(miǎn)疫(yì)共沉(chén)澱實驗很(hěn)像(xiàng)，不(bù)同的是(shì)免(miǎn)疫共(gòng)沉澱是在(zài)細胞裏進行(háng)的(dí)。）

原(yuán)理(lǐ)：將(jiāng)一種(zhǒng)蛋白質固定於(yú)某種(zhǒng)基(jī)質(zhì)上(shàng)（如Sepharose），但(dàn)細胞(bāo)抽提(tí)液經(jīng)過(guò)該基(jī)質時，可與該(gāi)固(gù)定(dìng)蛋白(bái)相互作(zuò)用(yòng)的配體蛋白(bái)被(bèi)吸(xī)附，而沒(méi)有被(bèi)吸附的(dí)“雜質(zhì)"則(zé)隨洗脫(tuō)液流出(chū)。被(bèi)吸附的(dí)蛋白可以(yǐ)通過改變洗(xǐ)脫(tuō)液或(huò)洗(xǐ)脫(tuō)條件而回收(shōu)下來(lái)。

為(wéi)了(liǎo)更(gēng)有(yǒu)效(xiào)地利用(yòng)pull down技術，可(kě)以將待(dài)純化(huà)的蛋白(bái)以(yǐ)融(róng)合(hé)蛋白的(dí)形式(shì)表(biǎo)達，即將“誘餌"蛋白與一種(zhǒng)易於(yú)純化(huà)的配體(tǐ)蛋白(bái)相融(róng)合。1988年(nián)Smith等利(lì)用穀胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移(yí)酶（GST）融合標(biāo)簽從細(xì)菌(jūn)中一步(bù)純化(huà)出(chū)GST融合(hé)蛋白(bái)。

五(wǔ)，雙分(fēn)子(zǐ)熒光(guāng)互(hù)補技(jì)術

雙(shuāng)分(fēn)子熒(yíng)光(guāng)互(hù)補（Bimolecular fluorescence complementation, BiFC），該技術(shù)是利用熒光蛋白(bái)的特點來(lái)研(yán)究(jiū)蛋白的相(xiāng)互(hù)作用(yòng)。

熒光蛋(dàn)白(bái)可從特定(dìng)的(dí)位點(diǎn)被分(fēn)開，產(chǎn)生兩個非熒光活(huó)性片(piàn)段(duàn)即N端片(piàn)段（N-fragment）和(hé)C端片(piàn)段（C-fragment）（VN及VC）。當兩(liǎng)片(piàn)段分別被融合(hé)到相(xiāng)互作用的(dí)蛋(dàn)白上(shàng)時，會(huì)因蛋白的相互作用力而被拉近(jìn)，發生(shēng)互補從而重新構(gòu)建(jiàn)成有(yǒu)活性(xìng)的熒(yíng)光(guāng)蛋(dàn)白(bái)並(bìng)在(zài)激(jī)發光(guāng)下(xià)產生熒光。因(yīn)此利用(yòng)熒(yíng)光顯微(wēi)鏡(jìng)就(jiù)可(kě)以(yǐ)直(zhí)接(jiē)通過(guò)觀(guān)察熒光(guāng)有無來(lái)判(pàn)斷(duàn)蛋(dàn)白(bái)是否(fǒu)發(fā)生(shēng)相(xiāng)互作(zuò)用(yòng)。

這(zhè)是在活細(xì)胞(bāo)中觀(guān)察(chá)蛋白(bái)相(xiāng)互作用的很(hěn)好的(dí)方(fāng)法。

這個方法還是(shì)存在(zài)假陽(yáng)性的，細胞裏大量(liáng)表(biǎo)達的分(fēn)段(duàn)的黃(huáng)色熒光蛋(dàn)白(bái)（YFP）可能(néng)會不(bù)受(shòu)研(yán)究(jiū)蛋白(bái)的(dí)結合與(yǔ)否而自己(jǐ)結合在(zài)一(yī)起(qǐ)，所以陰性對照(zhào)的使(shǐ)用(yòng)非常重要(yào)。

更多有(yǒu)關研(yán)究蛋白質(zhì)相互(hù)作用(yòng)的(dí)方法(fǎ)，請聯係(xì)天津益元利康(kāng)生物(wù)科(kē)技有限公(gōng)司(sī)。