細菌(jūn)轉化(huà)是(shì)受體細菌(jūn)以低(dī)頻(pín)率從(cóng)環境(jìng)中(zhōng)吸(xī)收外(wài)源DNA的(dí)天然過程(chéng)
，經轉化(huà)後的細菌可(kě)表達相(xiāng)應(yīng)的(dí)遺傳形(xíng)狀(zhuàng)
，是遺(yí)傳(chuán)多(duō)樣(yàng)性的(dí)來(lái)源之(zhī)一(yī)
，也(yě)可(kě)能為(wéi)宿主細(xì)菌(jūn)帶來額外(wài)的(dí)好(hǎo)處(chǔ)（如(rú)抗(kàng)生素抗(kàng)性(xìng)）
。感(gǎn)受態細(xì)胞是通過(guò)物(wù)理(lǐ)或化(huà)學方(fāng)法(fǎ)進行誘導
，使其(qí)處於(yú)最(zuì)適攝取(qǔ)或(huò)容(róng)納外(wài)源(yuán)DNA的(dí)生理狀(zhuàng)態
，可高效吸(xī)收(shōu)環境中(zhōng)的DNA分子
。那麼(mó)你知道該如(rú)何選擇(zé)合適的感(gǎn)受態(tài)細胞(bāo)嗎？讓我們一(yī)起(qǐ)來看看吧！

  感受態細胞常(cháng)用於分子(zǐ)克隆(lóng)中(zhōng)
，用(yòng)於(yú)復製增(zēng)殖重組DNA分(fēn)子(zǐ)
。但感受(shòu)態(tài)細(xì)胞多種多樣(yàng)
，當選(xuǎn)擇(zé)感受態細(xì)胞進行轉化時
，需要考慮(lǜ)多(duō)種因素(sù)
，如轉化(huà)方式(shì)，轉化效率(shuài)，轉(zhuǎn)化通(tōng)量(liáng)，感受態(tài)細(xì)胞(bāo)的遺傳背景(jǐng)等
，更重要(yào)的(dí)是實驗(yàn)研究目(mù)標
。這(zhè)些因(yīn)素會直接(jiē)影響細菌(jūn)轉化的成(chéng)功(gōng)率(shuài)
。

一(yī)，轉(zhuǎn)化(huà)方式

  選擇(zé)感受態(tài)細胞時
，轉(zhuǎn)化方式是(shì)需要考慮(lǜ)的重要因素之一
。轉化(huà)方(fāng)式分為熱激和電轉(zhuǎn)兩(liǎng)種(zhǒng)
，對(duì)應(yīng)的感(gǎn)受(shòu)態細(xì)胞即(jí)為化學(xué)感(gǎn)受(shòu)態(tài)細(xì)胞和電轉感(gǎn)受態細(xì)胞
。選擇哪(nǎ)種(zhǒng)轉(zhuǎn)化(huà)方式取(qǔ)決於(yú)實驗所(suǒ)需(xū)的轉化效率(shuài)，所轉化質(zhì)粒(lì)DNA的(dí)類型，數量及(jí)復(fù)雜(zá)度(dù)等(děng)
。

熱激(jī)和(hé)電轉兩種(zhǒng)轉(zhuǎn)化(huà)方式各有(yǒu)優劣
。熱(rè)激（化學(xué)轉化(huà)）不需(xū)要(yào)配套設備(bèi)
，一般實驗(yàn)室(shì)均可進(jìn)行(háng)
，轉化效(xiào)率能(néng)滿足日(rì)常克(kè)隆(lóng)或(huò)亞(yà)克隆(lóng)需求(qiú)
。由於(yú)化(huà)學(xué)感(gǎn)受(shòu)態細胞(bāo)是(shì)通過陽(yáng)離子(zǐ)和熱激處(chǔ)理(lǐ)使(shǐ)其細胞膜穿(chuān)透(tòu)性增強
，所(suǒ)以對(duì)於(yú)某(mǒu)些(xiē)具(jù)有細胞(bāo)壁(bì)的菌株(zhū)
，化學轉化則不(bù)太適合(hé)
。

  相比較(jiào)而言
，電(diàn)轉(zhuǎn)的(dí)轉(zhuǎn)化效(xiào)率(shuài)更高
。因(yīn)此電(diàn)轉可(kě)用於不(bù)同濃度(dù)（從低濃度(dù)到(dào)飽(bǎo)和濃度(dù)），不同(tóng)大(dà)小，不同復(fù)雜(zá)度(dù)DNA的(dí)轉(zhuǎn)化
。那些不(bù)能製(zhì)成化(huà)學感受(shòu)態的菌株可(kě)以製(zhì)成(chéng)電轉感受態
。但進(jìn)行電(diàn)轉需要額外(wài)的設(shè)備
，如(rú)電轉(zhuǎn)儀和電轉杯
。此外
，針對(duì)不同(tóng)的(dí)菌株
，可能還需要對(duì)電(diàn)轉方(fāng)案(àn)進行(háng)優(yōu)化
。

二，轉(zhuǎn)化效(xiào)率(shuài)

  轉化(huà)效率(shuài)可(kě)反映出(chū)感(gǎn)受態細胞(bāo)攝(shè)取(qǔ)超(chāo)螺旋質粒的數量
，因此轉(zhuǎn)化效率(shuài)會(huì)影(yǐng)響(xiǎng)到克隆效率
。感受態細(xì)胞具(jù)有不同(tóng)的轉(zhuǎn)化效率
，受(shòu)製(zhì)備方法(fǎ)，所(suǒ)轉(zhuǎn)化(huà)DNA類(lèi)型，存(cún)儲條件等多(duō)種(zhǒng)因(yīn)素的(dí)影(yǐng)響
。

  對於大部分分子克隆(lóng)實驗(yàn)
，106至(zhì)1010 CFU/µg的轉化效(xiào)率(shuài)已經(jīng)足(zú)夠(gòu)
。對於(yú)超(chāo)螺旋質粒的(dí)常(cháng)規(guī)克隆(lóng)或亞克(kè)隆(lóng)
，大(dà)約106 CFU/µg級(jí)別的(dí)轉化效(xiào)率(shuài)即(jí)可滿(mǎn)足
。對於(yú)復雜DNA
，如平末端連接產(chǎn)物(wù)，短插(chā)入(rù)片(piàn)段(duàn)或微(wēi)量DNA
，需要具(jù)有更高(gāo)轉化(huà)效率（~108–109 CFU/µg）的感(gǎn)受態細(xì)胞(bāo)
。電(diàn)轉感(gǎn)受態細胞（轉(zhuǎn)化(huà)效(xiào)率(shuài)>1×1010 CFU/µg）則推薦(jiàn)用於最(zuì)ju挑戰(zhàn)的細菌轉化(huà)
，如gDNA或cDNA文(wén)庫(kù)構建(jiàn)，>30 kb質粒的轉化(huà)等(děng)
。

三(sān)，轉(zhuǎn)化通量(liáng)

  要進行(háng)的(dí)轉(zhuǎn)化(huà)反應(yīng)數(shù)量多少也是一個需要考慮的因(yīn)素(sù)
。由於需要電(diàn)轉儀和(hé)電擊杯
，且(qiě)設置自(zì)動化(huà)流(liú)程比(bǐ)較困難(nán)
，所以(yǐ)電(diàn)轉不太適(shì)用(yòng)於進行(háng)高通(tōng)量分子(zǐ)克(kè)隆
。

  相(xiāng)比之(zhī)下(xià)
，使(shǐ)用(yòng)化學(xué)感(gǎn)受態細胞通過熱激進(jìn)行轉(zhuǎn)化可以(yǐ)靈活用於(yú)不(bù)同的實驗通量
。對於低通(tōng)量(liáng)的細(xì)菌轉化(huà)
，單(dān)管包(bāo)裝的化學感受(shòu)態(tài)細胞(bāo)可以直(zhí)接進行(háng)熱(rè)激
，可(kě)避免因(yīn)反(fǎn)復(fù)凍(dòng)融造成的(dí)轉(zhuǎn)化(huà)效率(shuài)降低
。對於中(zhōng)通(tōng)量的細菌(jūn)轉化(huà)
，可選擇預(yù)裝入聯(lián)管中的感受(shòu)態細(xì)胞(bāo)
，再借(jiè)助多(duō)通(tōng)道移液器(qì)進(jìn)行(háng)轉化(huà)
。對於高通(tōng)量細菌(jūn)轉化(huà)
，選擇(zé)預裝入96孔板(bǎn)的感受(shòu)態細胞
，可(kě)實(shí)現模(mó)塊化(huà)孵育
，甚至(zhì)可兼(jiān)容自動化(huà)
。

四，細菌基(jī)因(yīn)型

  一(yī)個細菌菌(jūn)株定義(yì)為(wéi)一個細(xì)菌種類下(xià)麵(miàn)的一個(gè)子(zǐ)類(lèi)
，相比親本野生(shēng)型具(jù)有某些(xiē)特定的遺(yí)傳變異(yì)
。常用於(yú)細(xì)菌轉化(huà)的(dí)大腸(cháng)杆(gān)菌菌株(zhū)包(bāo)括(kuò)DH5α，BL21，HB101和JM109
。每(měi)個(gè)菌(jūn)株可通過基因(yīn)型(xíng)進行(háng)描(miáo)述
，基因(yīn)型(xíng)中列(liè)出(chū)了(liǎo)諸(zhū)如(rú)插入(rù)或(huò)缺失(shī)突變
。菌(jūn)株的基因型在決(jué)定(dìng)其(qí)是否(fǒu)適用(yòng)於特定(dìng)克隆實驗中具(jù)有關鍵作用
。

  基因(yīn)的功能和表型(xíng)可通過(guò)基因型(xíng)中的三個字母符號來表示(shì)
。相(xiāng)關(guān)的(dí)基(jī)因(yīn)可通過三個字(zì)母基(jī)因名(míng)稱(chēng)後麵的大寫(xiě)字母進(jìn)行(háng)區(qū)別(bié)
，如(rú)lacY和lacZ是lac操縱子的兩個不同(tóng)基因
。表型也可通過基因(yīn)型(xíng)中以大寫字(zì)母(mǔ)開頭(tóu)且(qiě)不(bù)是(shì)斜(xié)體的幾(jī)個(gè)字(zì)母進(jìn)行鑒定(dìng)
，如(rú)圖(tú)3中TetR代表(biǎo)INV110菌(jūn)株的四(sì)環素(sù)抗(kàng)性
。

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