>
服務熱綫(xiàn):
更新時間:2023-11-24
點擊次數:2019
你(nǐ)知(zhī)道抗體的保存條件都有(yǒu)哪些(xiē)嗎?讓我們(mén)一(yī)起來(lái)看看吧!
一(yī),抗體(tǐ)的穩定性
抗體是(shì)免疫(yì)係統中(zhōng)最重(zhòng)要(yào)的分(fēn)子(zǐ)之(zhī)一(yī),其(qí)穩定(dìng)性是(shì)自然進(jìn)化篩選的結果(guǒ)。在(zài)眾多物種中,抗體分(fēn)子形(xíng)成(chéng)了保守(shǒu)而(ér)穩定(dìng)的(dí)結(jié)構(gòu),分(fēn)子(zǐ)中(zhōng)70% 氨基(jī)酸(suān)殘基(免疫(yì)球蛋白(bái)結(jié)構域(yù))以(yǐ)beta片層(beta-sheet)形(xíng)式(shì)堆疊,形成緊(jǐn)密並(bìng)能(néng)耐(nài)受(shòu)蛋(dàn)白(bái)酶作(zuò)用的(dí)“三明(míng)治"結(jié)構,輕(qīng)鏈和重鏈通(tōng)過保守的二(èr)硫(liú)鍵(jiàn)形成具(jù)有三個結(jié)構域(yù)的免疫球蛋白(bái),大(dà)大提高了分子本身的穩(wěn)定性。
抗(kàng)體(tǐ)主要(yào)涉(shè)及化(huà)學(xué)或物理不(bù)穩定性。化(huà)學不(bù)穩定(dìng)性是指多(duō)肽或(huò)蛋白質(zhì)結構內共價鍵的形成(chéng)或破(pò)壞。蛋(dàn)白(bái)質化學失活(huó)機(jī)製主(zhǔ)要(yào)包(bāo)括聚合作用,重(zhòng)要氨基(jī)酸的變(biàn)化(huà),如肽鍵(jiàn)在稀酸條(tiáo)件(jiàn)下被水解;半(bàn)胱氨(ān)酸(suān),色氨酸(suān),甲硫氨酸(suān)的(dí)氧(yǎng)化(huà);二硫鍵的(dí)還原;用金(jīn)屬離子(zǐ)修飾巰基形(xíng)成(chéng)硫醇(chún)鹽(yán);天(tiān)冬酰(xiān)胺(àn)與(yǔ)穀氨(ān)酰胺(àn)的(dí)脫(tuō)酰(xiān)胺;氨(ān)基酸(suān)消(xiāo)旋,寡(guǎ)聚蛋白解聚成(chéng)單體(tǐ)等(děng)。而抗體(tǐ)結構(gòu)的(dí)展開,解(jiě)離(lí),變(biàn)性(xìng),聚(jù)集(jí)和沉澱被稱為構(gòu)象(xiàng)或(huò)物(wù)理不穩定(dìng)性。
zhong所周知(zhī),儲存條件(pH值,緩衝液類型,穩定劑(jì),防腐(fǔ)劑,蛋白酶抑製(zhì)劑(jì),溫(wēn)度和(hé)反復解凍(dòng))在抗體(tǐ)穩定性(xìng)中(zhōng)起著至關(guān)重(zhòng)要(yào)的作用。
二,保存(cún)溫度(dù)
每種樣(yàng)品均(jūn)有(yǒu)其(qí)穩(wěn)定(dìng)的溫度範圍,溫度升(shēng)高(gāo)會(huì)引(yǐn)起許(xǔ)多(duō)物理(lǐ)和(hé)化(huà)學變(biàn)化(huà),如(rú)溫度升高10℃,氧化反應約加快(kuài)數(shù)倍(bèi),酶(méi)促(cù)反應約(yuē)增(zēng)加1-3倍(bèi);又(yòu)如多(duō)數蛋(dàn)白(bái)在(zài)60℃以(yǐ)上開始變(biàn)性,熱變性(xìng)通常(cháng)是不可逆的(dí),不利於物質(zhì)的穩(wěn)定存在。另(lìng)外,適宜(yí)的(dí)溫度(dù)(如(rú)室溫)又是微(wēi)生(shēng)物汙染(rǎn)的重要(yào)條(tiáo)件。而(ér)低溫卻可以抑製(zhì)氧化,水(shuǐ)解等化學(xué)反應及(jí)微(wēi)生物生(shēng)長(cháng),使(shǐ)微生物處(chǔ)於生命(mìng)遲(chí)緩和隱蔽狀(zhuàng)態。故大多(duō)數(shù)生化樣(yàng)品(pǐn)選擇低(dī)溫保存,其穩(wěn)定性可大(dà)大(dà)增加(jiā)。
通(tōng)常蛋白質短(duǎn)期在4℃中儲存(cún)穩(wěn)定,不穩(wěn)定(dìng)的蛋白(bái)質應儲存在-20℃,而極不(bù)穩定(dìng)的蛋白(bái)質存(cún)儲在-70℃。然而在冷凍過(guò)程中會產(chǎn)生大(dà)量(liáng)的(dí)小(xiǎo)冰晶(jīng),形(xíng)成(chéng)更大(dà)的冰(bīng)-水(shuǐ)界麵表(biǎo)麵積(jī),冰-水表麵麵積(jī)的(dí)增加(jiā)與(yǔ)蛋白(bái)質構象(xiàng)的(dí)變化(huà)和蛋白質聚集(jí)的(dí)增(zēng)加有關,因此需(xū)要(yào)避免反復凍融。
凍幹(gān)粉抗(kàng)體(tǐ),穩定(dìng)性高(gāo),可(kě)在-20℃,-80℃條件中長(cháng)時間保(bǎo)存(cún)(長達(dá)數年(nián)),4℃環(huán)境也較為(wéi)穩(wěn)定。權衡各(gè)種因素,凍(dòng)幹粉(fěn)抗體一(yī)般保存在(zài)-20℃,取(qǔ)用方(fāng)便,保(bǎo)存(cún)時間(jiān)長(cháng)。粉末(mò)狀(zhuàng)抗(kàng)體(tǐ)溶解(jiě)後即(jí)變成液(yè)體狀態(tài)抗(kàng)體(tǐ),保存(cún)條件(jiàn)發生變(biàn)化。需要按照說(shuō)明(míng)書或者液體(tǐ)抗體保存(cún)方(fāng)法(最(zuì)好分(fēn)裝(zhuāng))。
三,蛋白(bái)質保存濃(nóng)度(dù)
通常蛋白質的(dí)濃(nóng)度也是影(yǐng)響(xiǎng)穩(wěn)定(dìng)性(xìng)重要(yào)因素,一(yī)般蛋(dàn)白(bái)質(zhì)在高(gāo)濃度(1 mg/ml或(huò)者更(gēng)高(gāo))溶(róng)液中(zhōng)比較穩定(dìng),不容易降(jiàng)解(jiě),因為(wéi)液態蛋(dàn)白質容(róng)易受水(shuǐ)化(huà)作(zuò)用(yòng)的(dí)影響(xiǎng),保存(cún)時濃度不能(néng)太低,否則可能引起(qǐ)亞基蛋(dàn)白(bái)和輔助因子解離,會(huì)導(dǎo)致結構鬆散(sàn),穩定(dìng)性下(xià)降而易於(yú)失活(huó)。
因此部(bù)分抗體(tǐ)試(shì)劑(jì)中加(jiā)入(rù)了牛血清(qīng)白(bái)蛋白(BSA)作(zuò)為蛋白質穩(wěn)定(dìng)劑來防止降(jiàng)解(jiě)。加入(rù)BSA能(néng)夠(gòu)抑(yì)製(zhì)冷(lěng)凍引起的蛋白(bái)質去(qù)折(zhē)疊,通(tōng)過增加(jiā)蛋白(bái)質的起始濃度,能(néng)夠(gòu)增(zēng)強(qiáng)在(zài)凍融(róng)過程中(zhōng)蛋白質(zhì)製備物對(duì)損(sǔn)傷的(dí)耐受性。當(dāng)蛋(dàn)白質的起始濃(nóng)度增高時,抗體變(biàn)性(xìng)的百分比也(yě)會下降。另一(yī)方麵(miàn),加入的蛋白還能(néng)盡(jìn)可(kě)能減少抗體由於管壁吸(xī)附所(suǒ)造成(chéng)的損(sǔn)失。
當抗體(tǐ)稀釋至(zhì)工(gōng)作濃度後,應(yīng)當及(jí)時使用,在4℃盡(jìn)量不要超過1天(tiān)。
更多(duō)有關(guān)抗(kàng)體的(dí)保(bǎo)存(cún)條(tiáo)件,請聯(lián)係——天(tiān)津益元(yuán)利康生(shēng)物科技(jì)有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司。
掃(sǎo)碼加微(wēi)信