細胞消(xiāo)化(huà)的(dí)方法有(yǒu)哪些(xiē)
？

我們的細胞在培養時大部分(fēn)會以貼(tiē)壁的形式(shì)生長，它(tā)們在機體內時，也是與(yǔ)其(qí)他(tā)細胞(bāo)或者細胞外基(jī)質(zhì)結(jié)合(hé)的(dí)。細胞培養過程(chéng)中使用的wan全(quán)培養基(jī)中(zhōng)的血(xiě)清(qīng)，含(hán)有許多帶(dài)陽性電荷的促(cù)細胞附著因(yīn)子(層(céng)黏連蛋(dàn)白 Laminine，纖維連(lián)接(jiē)蛋(dàn)白 Fibronectin 等胞外基質），能(néng)幫(bāng)助細(xì)胞(bāo)附(fù)著(zhuó)於帶(dài)陰性電荷(hé)的(dí)底(dǐ)物上，並形(xíng)成連接(jiē)，貼壁伸展。使(shǐ)細胞解除(chú)這(zhè)種附(fù)著(zhuó)，就是細胞(bāo)消(xiāo)化。那(nà)麼(mó)你知(zhī)道細(xì)胞(bāo)消化(huà)的(dí)方法有哪(nǎ)些(xiē)嗎
？讓我們一起(qǐ)來看看(kàn)吧！

一，機械(xiè)消化法

直接用培(péi)養(yǎng)基(jī)吹打(dǎ)或使(shǐ)用細胞刮刀，通過(guò)外力使細(xì)胞解(jiě)除貼(tiē)壁狀(zhuàng)態，一般用於(yú)不(bù)需要繼續(xù)培養的(dí)細胞，相較於(yú)其(qí)他方法，機(jī)械消化(huà)法(fǎ)無法(fǎ)量化控(kòng)製，細胞分(fēn)散效果差，且會造成大量(liáng)細(xì)胞破(pò)損(sǔn)，影(yǐng)響細(xì)胞傳(chuán)代狀(zhuàng)態(tài)。

二，離(lí)子螯合(hé)法

細(xì)胞(bāo)膜(mó)表麵(miàn)蛋白大多需(xū)要鈣(gài)，酶離子來維(wéi)持與胞(bāo)外(wài)基(jī)質的穩定鍵結，當(dāng)然(rán)也包(bāo)含各種粘附蛋(dàn)白(bái)（如：整(zhěng)合素(sù)，鈣黏著蛋白，橋粒等），螯合劑會在(zài)不破壞細(xì)胞(bāo)膜表麵蛋白(bái)的狀況(kuàng)下，抽離(lí)這些離(lí)子(zǐ)，使(shǐ)粘附(fù)蛋(dàn)白失(shī)活而(ér)減(jiǎn)少細(xì)胞(bāo)-細胞(bāo)間及(jí)細(xì)胞-底(dǐ)物間(jiān)的連接作用，使細胞容易(yì)與培養底(dǐ)物(wù)分離(lí)。

0.02% EDTA是常(cháng)用的離(lí)子螯合(hé)劑，在37℃效果(guǒ)最(zuì)jia（消化敏感的細胞(bāo)可在4℃作用），適(shì)用(yòng)於消(xiāo)化一般(bān)貼壁性細胞或(huò)細(xì)胞(bāo)表麵標(biāo)記(jì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。

但(dàn)EDTA無(wú)法(fǎ)用血清(qīng)終止其(qí)反(fǎn)應，所以在消(xiāo)化細胞(bāo)後必(bì)須(xū)用緩(huǎn)衝鹽溶(róng)液(yè)（如：PBS）清洗離(lí)心，以免(miǎn)影響後續(xù)細胞(bāo)貼壁(bì)效(xiào)果(guǒ)。

三，酶(méi)消(xiāo)化法

用(yòng)蛋白(bái)水解酶(méi)消(xiāo)化連接細胞(bāo)及培養底物的蛋白質，適用(yòng)於(yú)消化(huà)貼(tiē)壁(bì)性稍強的細胞。上(shàng)述實(shí)驗方法中最(zuì)常見(jiàn)的(dí)還(huán)是(shì)胰酶消化(huà)。大(dà)部(bù)分細(xì)胞消化的時候是(shì)隻要用(yòng)胰(yí)酶潤洗(xǐ)一遍(biàn)即可，但(dàn)是我(wǒ)們(mén)發現吸(xī)去(qù)胰蛋白酶(méi)後(hòu)，殘留的(dí)那(nà)些附著在細胞(bāo)表麵的(dí)微量(liáng)胰酶(méi)在37℃一般不(bù)到(dào)2分(fēn)鐘(zhōng)足夠(gòu)消化(huà)細胞(bāo)（絕大(dà)部分1分鐘(zhōng)不到）。對(duì)於(yú)這些細(xì)胞(bāo)原則上(shàng)不要用(yòng)胰酶孵(fū)育細胞(bāo)，連(lián)續(xù)這樣傳代(dài)，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的(dí)程序是先采用(yòng)PBS潤洗細胞(bāo)吸(xī)去(qù)，胰(yí)酶潤洗(xǐ)吸(xī)去(qù)，然(rán)後37℃消化(huà)細胞(bāo)。

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