細(xì)胞計數是指對細(xì)胞數量(liáng)進行定量測(cè)定(dìng)的(dí)方法(fǎ)。在細(xì)胞(bāo)培養實驗(yàn)中，通(tōng)過(guò)細胞計數(shù)來確(què)定細胞(bāo)培養(yǎng)的密度和數(shù)量(liáng)，可(kě)以(yǐ)掌握細胞生長的情況。同(tóng)時，細胞計數也是(shì)衡(héng)量不同實驗條件(jiàn)下(xià)細(xì)胞生長情(qíng)況的重要指(zhǐ)標之(zhī)一。那(nà)麼你(nǐ)知(zhī)道細(xì)胞(bāo)計數(shù)通用步驟(zhòu)有什麼(mó)嗎？有(yǒu)何注意事(shì)項(xiàng)呢？讓我(wǒ)們一起來看看(kàn)吧(bā)！

一，細(xì)胞計(jì)數的(dí)通用(yòng)方法(fǎ)

1. 以貼(tiē)壁生長的(dí)細(xì)胞(bāo)為例(lì)，消化後(hòu)的細胞(bāo)充分重懸吹(chuī)散(sàn)，取(qǔ)一(yī)部(bù)分(fēn)轉移至幹(gān)淨(jìng)的EP管(guǎn)內(nèi)，例如1mL;

2. 使用酒(jiǔ)精棉球輕(qīng)輕擦(cā)拭計(jì)數板表(biǎo)麵(miàn)和蓋玻(bō)片，把後(hòu)者的邊緣(yuán)微微(wēi)濕(shī)潤，然後(hòu)小心蓋在計數板的正中(zhōng)間(jiān)，邊(biān)緣(yuán)要能(néng)覆蓋住計數(shù)板上的(dí)凹槽；

3. 將(jiāng)剛才(cái)轉(zhuǎn)移至(zhì)EP管內的細(xì)胞(bāo)懸(xuán)液再次進行重(zhòng)復吹打，直到成為(wéi)單細(xì)胞懸(xuán)液，然(rán)後(hòu)吸20uL懸(xuán)液出(chū)來；

4. 將移(yí)液器吸頭抵(dǐ)在蓋(gài)玻(bō)片的(dí)上邊緣或下(xià)邊緣(yuán)，然(rán)後(hòu)緩緩打(dǎ)出(chū)液體，此(cǐ)時液體(tǐ)會因為(wéi)虹吸作用被(bèi)吸入(rù)蓋玻片(piàn)和計數板之(zhī)間的空隙內(nèi)；

5. 調(tiáo)整顯微(wēi)鏡，使用10倍物鏡(jìng)觀(guān)察(chá)，此時，視野內看(kàn)到的(dí)畫麵(miàn)應該(gāi)如下圖所(suǒ)示的中間(jiān)圓(yuán)形的(dí)紅色區域(yù)；

6. 接下來(lái)，要(yào)計(jì)算(suàn)圖(tú)中藍色(sè)區域(yù)的(dí)25個格子內的(dí)細(xì)胞總數(shù)，這一塊(kuài)區域(yù)的(dí)總麵(miàn)積是1mm2；

7. 計(jì)算(suàn)出(chū)總數(shù)後(hòu)，按(àn)照(zhào)下(xià)方公式進行計(jì)算，得(dé)到(dào)的(dí)結(jié)果就(jiù)是細胞濃(nóng)度(dù)，單位是個(gè)/mL

「25個格子內(nèi)的(dí)細胞總數(shù) x 10,000 = 細(xì)胞(bāo)濃度」

8. 進(jìn)一(yī)步(bù)計(jì)算(suàn)，可以(yǐ)得到細胞(bāo)總數。

「重(zhòng)懸細胞(bāo)的(dí)培養(yǎng)基體(tǐ)積(jī) x 細(xì)胞(bāo)密度(dù) = 細胞(bāo)總數(shù)」

二，血(xiě)球(qiú)計(jì)數板的注意事(shì)項

1. 細胞懸(xuán)液(yè)的製備(bèi)：需(xū)要將細(xì)胞懸(xuán)液(yè)che底(dǐ)吹散為(wéi)單(dān)細胞懸(xuán)液，否則大量細(xì)胞(bāo)團塊的存(cún)在會讓(ràng)細(xì)胞計數結(jié)果(guǒ)有(yǒu)偏(piān)差(chà)；單(dān)細(xì)胞懸液(yè)準備好(hǎo)後，應立即往下操作，而不能等(děng)，否則細胞又(yòu)會(huì)慢(màn)慢聚集沉降(jiàng)成(chéng)團；

2. 計(jì)數(shù)階段：有的(dí)細(xì)胞會剛好落在計數(shù)板(bǎn)小方(fāng)格的綫上(shàng)，此(cǐ)時，要遵(zūn)循數左不數右，數(shù)上不(bù)數下的(dí)原則(zé)進(jìn)行計(jì)數(shù)；

3.細胞(bāo)太(tài)多或(huò)太(tài)少(shǎo)：如(rú)果數(shù)完25個(gè)格子(zǐ)，總數(shù)在200-500之(zhī)間(jiān)（圖a），可以(yǐ)繼(jì)續往(wǎng)下(xià)換算；

如低於200，則(zé)應該把(bǎ)整個(gè)懸(xuán)液區(qū)域(yù)一(yī)起計(jì)數(shù)（圖b），然後(hòu)得數乘以(yǐ)1111得到細胞濃度(dù)；

如(rú)果大於(yú)500，則應該重新計數(shù)，但隻(zhī)計(jì)算(suàn)25個放個內的單(dān)條對(duì)角綫(xiàn)上(shàng)的5個格(gé)子的總數(shù)（圖(tú)c），然後(hòu)乘(chéng)以50,000得到細胞濃度；

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