PCR技術(shù)問世已有(yǒu)30多(duō)年，期(qī)間(jiān)創新性生(shēng)物技(jì)術(shù)不(bù)斷(duàn)湧(yǒng)現，然(rán)而(ér)PCR技(jì)術的地(dì)位依然不可撼動，PCR的全稱是(shì)聚合酶(méi)鏈式反應（Polymerase Chain Reaction），簡(jiǎn)單說來，PCR技(jì)術是(shì)利用(yòng)DNA雙鏈復(fù)製(zhì)的原理，在(zài)生(shēng)物體外大量擴增特(tè)定(dìng)DNA片(piàn)段的技(jì)術，PCR作(zuò)為一項(xiàng)bi不可少的(dí)技(jì)術手(shǒu)段，仍(réng)被廣泛(fàn)應用(yòng)在基因克隆(lóng)，基(jī)因(yīn)表(biǎo)達分(fēn)析，病原(yuán)體(tǐ)檢(jiǎn)測(cè)，疾病(bìng)診斷，基(jī)因測(cè)序(xù)，生物製(zhì)藥，基(jī)因(yīn)/細胞治療(liáo)，分(fēn)子(zǐ)育種(zhǒng)，物(wù)種(zhǒng)鑒定(dìng)，法醫鑒定等各(gè)個領域。

標準的(dí)PCR過程包(bāo)括三(sān)個(gè)步驟
：變(biàn)性(Denaturation)——退火(huǒ)(Annealing)——延伸(Extension)。

一(yī)，變(biàn)性(xìng)

變(biàn)性(xìng)是通過高溫(wēn)（通常為90～95℃）破壞雙(shuāng)鏈DNA的氫鍵，使(shǐ)其變成單鏈DNA。變(biàn)性的(dí)時(shí)間和溫(wēn)度會(huì)根據DNA片段的復(fù)雜程度，GC含量(liáng)，大小以(yǐ)及緩衝(chōng)液(yè)的鹽濃度(dù)來(lái)確定。

二，退火

退(tuì)火是(shì)指在(zài)DNA形成單(dān)鏈之後(hòu)，通過降低溫度，使(shǐ)引(yǐn)物能夠(gòu)結(jié)合到單(dān)鏈(liàn)DNA的目標區(qū)域(yù)上。一(yī)般情(qíng)況下(xià)，引物完成退火所需的孵育時(shí)間為0.5-2分鐘。通(tōng)過(guò)計算PCR擴增引(yǐn)物(wù)的(dí)熔(róng)解(jiě)溫度（Tm），可以確(què)定(dìng)適(shì)當(dāng)的退火溫度，通常比(bǐ)引物的Tm低3-5℃。

三，延(yán)伸(shēn)

指(zhǐ)DNA模(mó)板(bǎn)--引物結(jié)合(hé)物(wù)在DNA聚合酶的(dí)作用(yòng)下(xià)，以dNTP為(wéi)反(fǎn)應(yīng)原料，目標(biāo)序(xù)列為(wéi)模板(bǎn)，按照鹼基(jī)互(hù)補配對(duì)與半(bàn)保(bǎo)留(liú)復製原理，合(hé)成一條新的(dí)與(yǔ)模(mó)板DNA 鏈(liàn)互補的鏈(liàn)。

在(zài)延(yán)伸階(jiē)段，DNA模板與(yǔ)引(yǐn)物結合(hé)物在DNA聚合(hé)酶(méi)的(dí)作用下(xià)，以dNTP為反應原(yuán)料，在(zài)模板(bǎn)的(dí)指(zhǐ)導下，按照(zhào)鹼基(jī)互補配對(duì)和半保(bǎo)留(liú)復製原(yuán)理，合成一條(tiáo)新的與模(mó)板(bǎn)DNA鏈(liàn)互補的(dí)鏈。一般將(jiāng)溫(wēn)度(dù)設(shè)定在70-75℃之(zhī)間(jiān)，因(yīn)為熱穩(wěn)定(dìng)性(xìng)DNA聚合酶在這個溫度下活性最佳。延伸的時間取(qǔ)決於(yú)DNA聚(jù)合酶(méi)的合成(chéng)速(sù)度(dù)和目標DNA的長(cháng)度。當(dāng)目標片段的擴增長(cháng)度較長（如大於10 kb）時(shí)，除了需(xū)要(yào)增加(jiā)延伸時(shí)間(jiān)，還需降低溫度(dù)，以(yǐ)確保(bǎo)引物(wù)能在長(cháng)時間循(xún)環中保持酶的活性。另(lìng)外，假(jiǎ)如(rú)引物退(tuì)火溫度(dù)與延伸溫(wēn)度相(xiāng)差(chà)未超(chāo)過3℃，則(zé)退火和(hé)延(yán)伸溫(wēn)度(dù)可合(hé)並成一(yī)步，稱為兩步(bù)PCR法，可取代傳統(tǒng)的(dí)三步(bù)PCR法。兩(liǎng)步PCR法無需(xū)在退火(huǒ)和(hé)延(yán)伸之間轉換和(hé)穩定溫度，從(cóng)而縮短(duǎn)了PCR所(suǒ)需(xū)的(dí)時間。通(tōng)過重復變(biàn)性——退(tuì)火——延伸(shēn)這(zhè)三個(gè)過程，即可獲得(dé)更多(duō)的(dí)“半保留復製鏈(liàn)"，而這種(zhǒng)新(xīn)鏈(liàn)又(yòu)能作為(wéi)下個(gè)循環的(dí)模板，不斷(duàn)循環。

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