由於在(zài)流(liú)式細(xì)胞實驗(yàn)過程(chéng)中(zhōng)，熒光(guāng)抗體對單細胞懸(xuán)液的標(biāo)記效(xiào)果直接(jiē)影響實驗的(dí)數(shù)據質量。因此，需要(yào)考(kǎo)慮各(gè)種影響流(liú)式抗體品(pǐn)質及(jí)檢測效果的因素，例如(rú)抗體(tǐ)特(tè)異性(xìng)，熒光素信(xìn)號(hào)強弱(ruò)，熒光素標(biāo)記方式，同型(xíng)對照等(děng)。那(nà)麼(mó)你知(zhī)道我們(mén)該(gāi)如何選擇(zé)合適的流(liú)式(shì)抗體(tǐ)嗎(má)
？讓(ràng)我們(mén)一起來看(kàn)看(kàn)吧！

  流式(shì)抗體本身也是(shì)抗體(tǐ)，所以(yǐ)選擇流式抗(kàng)體一定(dìng)要(yào)滿足抗(kàng)體(tǐ)選擇最基本(běn)的(dí)條(tiáo)件：目標蛋(dàn)白特(tè)異性(xìng)，反應(yīng)種(zhǒng)屬以及應(yīng)用實驗。流式(shì)抗(kàng)體熒光標(biāo)記的方(fāng)式(shì)包(bāo)括直(zhí)接標記和(hé)間接(jiē)標(biāo)記兩種。在(zài)流式實驗(yàn)過(guò)程中，盡(jìn)量減少實(shí)驗(yàn)工序(xù)和過程(chéng)，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和(hé)準確(què)性。因(yīn)此在條件允(yǔn)許的(dí)範圍內，建議(yì)盡量(liáng)用(yòng)直(zhí)接標記的抗(kàng)體進(jìn)行(háng)實驗而不(bù)去(qù)做間接(jiē)標(biāo)記。

一(yī)，流(liú)式抗體熒光標(biāo)記的選擇

  如果(guǒ)實驗中(zhōng)檢測單一(yī)指標(biāo)：不同(tóng)熒光(guāng)標(biāo)記在不同的儀(yí)器上(shàng)強(qiáng)度(dù)不同(tóng)。以(yǐ)某儀(yí)器為(wéi)例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常來說，PEzui強(qiáng)，適(shì)用於弱表達抗原。FITC強(qiáng)度較弱(ruò)，適用於(yú)強(qiáng)表達(dá)抗原，使(shǐ)用範(fàn)圍(wéi)比較廣。用戶需(xū)根據(jù)檢(jiǎn)測(cè)的目標蛋(dàn)白進(jìn)行具(jù)體選(xuǎn)擇。

  如果同(tóng)時檢測多個(gè)指標：確認流(liú)式細胞儀能檢(jiǎn)測(cè)多少(shǎo)個通道(dào)，流(liú)式抗體每(měi)個(gè)通(tōng)道隻能選擇(zé)1種熒(yíng)光素。各個通(tōng)道之(zhī)間的熒(yíng)光素可以(yǐ)隨意搭(dā)配。如(rú)實驗者同(tóng)時檢測(cè)三(sān)個(gè)指標(biāo)，可(kě)以在下圖(tú)中綠色(sè)，黃色和紅色(sè)三(sān)個(gè)通道(dào)中各選一個適(shì)當(dāng)的熒光素標(biāo)記，FITC，PE和PE-cy5。切忌所(suǒ)有指標(biāo)選擇同一個通道(dào)的熒(yíng)光(guāng)標記，以(yǐ)防止熒光的重(zhòng)疊(dié)和(hé)相互(hù)幹擾，影響(xiǎng)最(zuì)後(hòu)結果(guǒ)。因此(cǐ)，流式細(xì)胞(bāo)儀的通道越(yuè)多(duō)，同一(yī)份樣(yàng)本能(néng)同時做(zuò)的(dí)表(biǎo)麵/胞內標誌(zhì)就(jiù)越多。常用熒光標(biāo)記包(bāo)括(kuò)FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。

二(èr)，同型(xíng)對(duì)照的(dí)選(xuǎn)擇：

  流式(shì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和其他抗(kàng)體相關(guān)實驗(yàn)有(yǒu)點(diǎn)不(bù)同(tóng)的就(jiù)是需要(yào)選擇(zé)同(tóng)型對照(zhào)。同(tóng)型(xíng)對照，是(shì)用(yòng)於(yú)消除(chú)由於抗體非特異性結合到(dào)細胞(bāo)表(biǎo)麵而(ér)產(chǎn)生(shēng)的背景染色(sè)，相(xiāng)當(dāng)於(yú)實(shí)驗的陰(yīn)性對照(zhào)。同型對照(zhào)選擇與(yǔ)標記抗(kàng)體同種屬來源(yuán)，同亞(yà)型，同熒光標(biāo)記(jì)的(dí)抗體。比如(rú)：抗(kàng)人的CD3的(dí)PE標(biāo)記(jì)的抗體，小(xiǎo)鼠的IgG2a。同型(xíng)對照選擇PE標記的小鼠(shǔ)的(dí)IgG2a。

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