在完(wán)成蛋白質純(chún)化(huà)後(hòu)，如(rú)果保存不(bù)當(dāng)，容易發生失活和變性的情況，那麼你(nǐ)知(zhī)道保存(cún)蛋白質的原(yuán)則及(jí)方(fāng)法(fǎ)有(yǒu)哪(nǎ)些(xiē)嗎？讓(ràng)我們(mén)一起來(lái)看(kàn)看吧！

一(yī)，原則(zé)

1. 低(dī)溫

保存(cún)蛋白質時，確(què)保(bǎo)在低溫條件下至(zhì)關重要。低(dī)溫(wēn)意(yì)味(wèi)著(zhuó)較低(dī)的(dí)能(néng)量水平，有(yǒu)助於(yú)減緩蛋(dàn)白質分(fēn)子內部的(dí)熱(rè)運動，減少鍵(jiàn)的(dí)斷裂可(kě)能性。此外，在(zài)低溫(wēn)下，微生物繁殖減(jiǎn)緩，潛(qián)在的蛋(dàn)白酶活性(xìng)降低，從(cóng)而有助(zhù)於維持蛋白質的(dí)活(huó)性。

2. 無菌

在進行蛋白(bái)質實(shí)驗(yàn)操(cāo)作(zuò)時，務必佩(pèi)戴(dài)手套。盡(jìn)管實驗室(shì)戴手套(tào)通常是為了(liǎo)保(bǎo)護實(shí)驗(yàn)者(zhě)自身，但在(zài)生(shēng)化實驗中，蛋白(bái)質是(shì)我們(mén)需(xū)要(yào)保(bǎo)護(hù)的主體(tǐ)。我們(mén)皮(pí)膚(fū)上存(cún)在一(yī)些蛋白酶，可(kě)能會降(jiàng)解(jiě)蛋(dàn)白樣品。此外，皮(pí)膚(fū)上的其(qí)他化(huà)學物(wù)質(zhì)也可能汙(wū)染蛋白(bái)樣(yàng)品。為了(liǎo)防止細(xì)菌生長，最好將蛋(dàn)白(bái)質(zhì)保(bǎo)存在(zài)經(jīng)過(guò)滅菌(jūn)處(chǔ)理的容(róng)器中。

3. 濃度(dù)

為(wéi)了(liǎo)提高(gāo)蛋(dàn)白質的(dí)穩定(dìng)性(xìng)，建議(yì)以(yǐ)較高濃度保存重(zhòng)組蛋(dàn)白質，最好保(bǎo)持在1mg/ml以上。高(gāo)濃度有助(zhù)於防(fáng)止(zhǐ)蛋(dàn)白質分子附(fù)著在塑料(liào)或玻璃(lí)管壁(bì)上。不容忽視的(dí)是，疏水性蛋白質(zhì)容(róng)易附著(zhuó)在管(guǎn)壁(bì)上。

4. 分裝

蛋白質需要冷(lěng)凍保存(cún)，但(dàn)在(zài)實驗中(zhōng)常(cháng)在(zài)室(shì)溫(wēn)或更高溫(wēn)度(dù)使用。反復凍融過(guò)程(chéng)中(zhōng)產生(shēng)的(dí)冰(bīng)晶(jīng)會損害(hài)蛋(dàn)白(bái)質的結構和(hé)構象(xiàng)。為減少凍(dòng)融(róng)次(cì)數，建議將(jiāng)純(chún)化後的蛋(dàn)白質(zhì)進行分裝(zhuāng)保(bǎo)存，每次(cì)使用(yòng)前(qián)融化(huà)所(suǒ)需量，以確保蛋白質樣(yàng)品(pǐn)經(jīng)歷單(dān)次凍融(róng)。

二(èr)，保(bǎo)存

1. 長(cháng)期保存(cún)

對(duì)於凍幹(gān)狀(zhuàng)態的(dí)重(zhòng)組蛋白(bái)，由(yóu)於處於wan全脫(tuō)水的狀態(tài)，在不(bù)受(shòu)潮(cháo)的情況(kuàng)下可以(yǐ)在冰(bīng)箱中(zhōng)保存(cún)數(shù)年。

對(duì)於復融後的重(zhòng)組蛋白，比較合適的(dí)保(bǎo)存方(fāng)式(shì)是分(fēn)裝後保(bǎo)存在 -20°C 或 -80°C，六(liù)個月內(nèi)一般是沒有問題(tí)的。

（1）分(fēn)裝有助(zhù)於zui大程度減(jiǎn)少反復(fù)凍(dòng)融對抗(kàng)體和重(zhòng)組(zǔ)蛋白活性的(dí)損害，並減少從(cóng)同(tóng)一(yī)管中多(duō)次(cì)吸取可能導(dǎo)致(zhì)的汙(wū)染。

（2）分裝的(dí)量(liáng)最(zuì)好(hǎo)按(àn)一次(cì)實驗用(yòng)完為(wéi)準，每份(fèn)至少不能少於(yú)10 µl。體(tǐ)積越(yuè)小(xiǎo)，蛋白濃度受(shòu)蒸(zhēng)發和(hé)管壁吸附(fù)影(yǐng)響(xiǎng)的可能性(xìng)越大。

（3）復融(róng)後(hòu)的(dí)分(fēn)裝(zhuāng)重(zhòng)組蛋白如果一次用不完，將剩(shèng)餘母液保存在 4℃，避免再凍(dòng)起來(lái)。

（4）蛋白工作液應(yīng)當在(zài)當天配(pèi)製並當(dāng)天(tiān)使用，最好不要(yào)在4℃超(chāo)過1天(tiān)。

2. 短(duǎn)期(qī)保存(cún)

對(duì)於短(duǎn)期(qī)保存，大多(duō)數(shù)蛋白質可(kě)以在(zài)4°C下保存，以避免(miǎn)反復凍融(róng)對活性(xìng)的影響。然而(ér)，4°C保存麵(miàn)臨(lín)微(wēi)生(shēng)物汙染(rǎn)的(dí)問(wèn)題。因此，如果保(bǎo)存(cún)時(shí)間(jiān)超過24小時，建議使用(yòng)0.22微(wēi)米的濾膜過濾樣品，然(rán)後(hòu)在(zài)無菌(jūn)管(guǎn)中(zhōng)保存。值得(dé)注(zhù)意(yì)的(dí)是，並(bìng)非所(suǒ)有蛋(dàn)白質(zhì)都(dū)適(shì)合在4°C下保(bǎo)存。

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