sigma聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑(TR-1003-G)

產(chǎn)品介紹：

聚凝胺(àn)是一種陽離子(zǐ)聚合(hé)物，可以大(dà)大(dà)提高(gāo)逆(nì)轉錄病毒(dú)或(huò)慢病(bìng)毒(dú)感染哺(bǔ)乳動(dòng)物(wù)細(xì)胞的(dí)效率(shuài)。它起到中和(hé)病(bìng)毒(dú)體與細(xì)胞(bāo)表麵之間(jiān)電(diàn)荷(hé)排(pái)斥的作用(yòng)，從(cóng)而提高(gāo)感染效率。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的(dí)效率在某些(xiē)細胞中(zhōng)顯著提高了(liǎo) 100 到 1,000 倍(bèi)，這是因為在(zài)感染過程中(zhōng)加(jiā)入了聚(jù)凝胺(àn)。含有 DMSO 的聚凝(níng)胺儲液還(huán)用於介導 DNA 轉移到(dào)多(duō)種細胞類型中，例(lì)如 CHO
，雞(jī)胚成纖維(wéi)細(xì)胞(bāo)
，NINH-3T3 和(hé)髓(suǐ)樣細胞。

產品應(yīng)用(yòng)：

一(yī)
，逆轉(zhuǎn)錄病毒(dú)感染(rǎn)

1.重(zhòng)組逆轉錄(lù)病毒儲(chǔ)液(yè)是(shì)通過(guò)將(jiāng) 5ml 生長(cháng)培養基（含(hán) 5％ 血(xiě)清(qīng)）添加接近匯合(hé)的轉染(rǎn)的(dí)逆轉錄(lù)病毒(dú)包裝細胞(bāo)單(dān)層細(xì)胞的 100mm 平板中來(lái)製備的(dí)。24 小時(shí)後(hòu)，去除培(péi)養基，並通過 0.45um 過濾(lǜ)器過濾。

2.將要(yào)感染該(gāi)重組(zǔ)逆(nì)轉錄病(bìng)毒儲(chǔ)液的細(xì)胞(bāo)以每個100mm平板500,000個細(xì)胞的(dí)量接(jiē)種在10mlwan全(quán)培(péi)養(yǎng)基中。

3. 24小時後，去(qù)除細胞(bāo)的(dí)生(shēng)長培養基。用2ml的(dí)病毒上清(qīng)液(yè)（或(huò)將(jiāng)病(bìng)毒儲液(yè)稀釋至 2ml）感(gǎn)染細(xì)胞，每(měi)毫(háo)升添(tiān)加5ug至10ug的聚(jù)凝胺(àn)（最終濃度），在 37°C 下孵育(yù)細(xì)胞 3 到 6 小時。

加(jiā)入(rù) 8 ml wan全培(péi)養(yǎng)基(jī)。感染三(sān)天(tiān)後(hòu)，將(jiāng)細(xì)胞(bāo)按 1：5 的比(bǐ)例分進(jìn)選擇培(péi)養(yǎng)基。

二(èr)
，轉(zhuǎn)染

將細胞鋪在wan全生長(cháng)培養基(jī)中(zhōng)，約(yuē)有(yǒu)50％匯(huì)合。鋪板(bǎn)後(hòu)18 至(zhì)24 小時(shí)，立即使(shǐ)用(yòng)以(yǐ)下方法製備DNA-培(péi)養基-聚(jù)凝胺溶(róng)液：(注(zhù)意：必(bì)須按(àn)照正(zhèng)確(què)的順序添(tiān)加(jiā)每個組件。)

1. wan全生長(cháng)培養基（60mm平板，2ml；100mm平(píng)板(bǎn)，3ml），加熱(rè)至(zhì)37℃。

2. 質粒DNA，10 ng至(zhì)10 ug。輕輕混合(hé)。

3. 聚(jù)凝胺(àn)的最終(zhōng)濃度為每(měi)毫升(shēng)5ug 至10ug。輕輕(qīng)混合(hé)

4. 從平(píng)板(bǎn)中(zhōng)去(qù)除培(péi)養(yǎng)基，並將(jiāng)DNA-培養基(jī)-聚凝(níng)胺溶液(yè)添(tiān)加(jiā)到(dào)細胞中。讓(ràng)細胞(bāo)在 37℃下孵育6到(dào)20小時(shí)，前6個小時(shí)大(dà)約每(měi)1.5個小時輕輕搖(yáo)動一次。

5. 去(qù)除(chú) DNA-培養基-聚(jù)凝胺溶(róng)液，並用(yòng)DMSO 儲液輕輕覆蓋細胞（在(zài)1X HBSS 中(zhōng)的(dí) 15％ DMSO：專門培養基每個60 mm平板3 ml，每(měi)個100 mm平板4 ml。手(shǒu)動(dòng)搖(yáo)動(dòng)培養皿10秒鐘，使溶液均(jūn)匀(yún)分布，然(rán)後將(jiāng)細胞置於37℃下(xià)溫育4分(fēn)鐘(zhōng)。

6. 立即去除DMSO儲(chǔ)液(yè)，並(bìng)用(yòng)wan全生(shēng)長培養基輕(qīng)輕(qīng)衝洗(xǐ)細(xì)胞兩(liǎng)次(cì)，每個60 mm培(péi)養皿(mǐn)每次洗滌(dí)用(yòng)5 ml，每個100 mm培養皿每次洗滌(dí)用(yòng)10 ml。

7. 將wan全(quán)生長培(péi)養(yǎng)基添加到細胞(bāo)中。

8. 若要獲(huò)得(dé)穩定(dìng)的(dí)轉(zhuǎn)化子，則(zé)去除(chú)生長培養(yǎng)基，並將(jiāng)細胞按1：5比例分進(jìn)選擇培養基。

9. 若要瞬(shùn)時表達(dá)，去除生長(cháng)培(péi)養基(jī)並添(tiān)加新(xīn)鮮(xiān)的(dí)生長(cháng)培養基(jī)。24至(zhì)72小時後收(shōu)獲(huò)細胞(bāo)和/或(huò)培(péi)養基。

產品屬性(xìng)：

外形：每毫升(shēng)無菌超純(chún)水溶解10mg聚乙(yǐ)烯。

儲(chǔ)存(cún)及(jí)穩(wěn)定性：在-20℃可(kě)保存長(cháng)達2年。

產(chǎn)品訂(dìng)購：