碧雲天(tiān)的脂(zhī)質(zhì)氧化MDA檢測試劑(jì)盒（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）是(shì)一種用(yòng)於(yú)測量脂質(zhì)氧化水(shuǐ)平的試(shì)劑盒(hé)。它采(cǎi)用(yòng)一種基於(yú)MDA和(hé)硫代ba比妥(tuǒ)酸(suān)（thiobarbituric acid, TBA）反應(yīng)的顯(xiǎn)色方(fāng)法來產生紅(hóng)色產物，然(rán)後通過(guò)比(bǐ)色法(fǎ)對(duì)血漿，血(xiě)清，尿液(yè)，動(dòng)植物(wù)組織或細(xì)胞(bāo)裂(liè)解液(yè)中的(dí)MDA進(jìn)行(háng)定量檢測(cè)。這種試劑盒(hé)被廣泛應(yīng)用於(yú)脂(zhī)質(zhì)氧(yǎng)化水(shuǐ)平的(dí)檢(jiǎn)測(cè)。

MDA（丙二醛）是生物體(tǐ)脂(zhī)質氧(yǎng)化(huà)的天(tiān)然產物。當動物(wù)或植(zhí)物細(xì)胞(bāo)經(jīng)受氧(yǎng)化(huà)應激時，脂質(zhì)氧(yǎng)化(huà)便(biàn)發生。脂(zhī)肪(fáng)酸在(zài)氧化過程中會逐(zhú)漸分解為(wéi)一係列復(fù)雜的(dí)化合物，其(qí)中包(bāo)括MDA。通(tōng)過(guò)測量MDA的(dí)水平(píng)，我們可(kě)以了(liǎo)解脂(zhī)質氧(yǎng)化的程度，因此(cǐ)MDA的測(cè)定(dìng)被廣泛用(yòng)作(zuò)脂質氧(yǎng)化水平的指標。除了氧化應激(jī)反應(yīng)外，生物(wù)體內的(dí)其他生(shēng)化反應也(yě)會產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase也(yě)能催化其產生(shēng)，但隻(zhī)要在測(cè)定(dìng)時設置適當(dāng)的(dí)對照，就能(néng)觀(guān)察到脂(zhī)質氧化水平的(dí)變(biàn)化。

以(yǐ)碧(bì)雲(yún)天的(dí)脂(zhī)質(zhì)氧(yǎng)化(huà)MDA檢測試劑盒(hé)（Lipid Peroxidation MDA Assay Kit）為(wéi)工具(jù)，通(tōng)過檢測MDA水(shuǐ)平，可以(yǐ)準確(què)評估生物體的脂質氧化程(chéng)度。這種(zhǒng)試劑盒符合(hé)脂質(zhì)氧(yǎng)化水平檢(jiǎn)測的(dí)需(xū)要(yào)，並且在科(kē)學研究(jiū)和(hé)臨床(chuáng)應(yīng)用(yòng)中(zhōng)得(dé)到(dào)廣泛(fàn)應用。

使用說明：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 血(xiě)漿(jiāng)，血清(qīng)或尿液(yè)樣(yàng)品(pǐn)製(zhì)備後(hòu)可(kě)以(yǐ)直接用於MDA測定(dìng)。

b. 組(zǔ)織或(huò)細(xì)胞可(kě)以使用(yòng)PBS裂解液進行匀(yún)漿或裂(liè)解。對於組織(zhī)，組(zǔ)織重量占(zhān)匀(yún)漿(jiāng)液(yè)或(huò)裂解液(yè)的(dí)比例(lì)為(wéi)10%
；對(duì)於細(xì)胞，每(měi)100萬細胞(bāo)使用0.1ml裂解(jiě)液或匀漿液(yè)。匀漿(jiāng)或裂(liè)解後，10,000g-12,000g離心10分鐘取(qǔ)上清用於(yú)後(hòu)續測定。對(duì)於(yú)一(yī)些特(tè)殊(shū)樣品，離(lí)心不能(néng)獲得(dé)澄(chéng)清的上(shàng)清溶液(yè)的，可(kě)以(yǐ)使(shǐ)用0.2微米孔(kǒng)徑的(dí)過濾器過(guò)濾(lǜ)以(yǐ)獲得澄清的樣品溶液。匀漿或裂解(jiě)等樣(yàng)品製備(bèi)步驟(zhòu)宜在冰浴或4℃進行操作。

2. 試劑盒的(dí)準備(bèi)工(gōng)作：

a. TBA儲存(cún)液(yè)的(dí)配製：稱(chēng)取適(shì)量TBA，用TBA配(pèi)製液配製成濃度(dù)為0.37%的TBA儲存液。例如18.5mg TBA用(yòng)5ml TBA配(pèi)製液(yè)配(pèi)製，或(huò)者(zhě)25mg TBA用6.76ml TBA配製(zhì)液(yè)配製，最(zuì)終濃度即為0.37%。TBA配(pèi)製(zhì)液(yè)需wan全(quán)溶解後再(zài)使用，可以(yǐ)加(jiā)熱(rè)到70℃以(yǐ)促(cù)進溶解。TBA儲存液(yè)較難(nán)溶(róng)解，需加(jiā)熱到(dào)70℃，並(bìng)通過劇(jù)烈(liè)Vortex以促(cù)進溶(róng)解。配(pèi)製好(hǎo)的TBA儲(chǔ)存液室溫避(bì)光保(bǎo)存(cún)，至少3個月(yuè)內(nèi)有(yǒu)效。

3. 樣(yàng)品(pǐn)測定：

a. 在離心管或其它(tā)適當容器內加入(rù)0.1ml匀(yún)漿(jiāng)液(yè)，裂(liè)解液或PBS等(děng)適當(dāng)溶(róng)液(yè)作為空白(bái)對照，加入0.1ml上述不(bù)同(tóng)濃(nóng)度(dù)標(biāo)準(zhǔn)品用(yòng)於(yú)製作(zuò)標準(zhǔn)曲綫，加入(rù)0.1ml樣(yàng)品用(yòng)於(yú)測定(dìng)
；隨後(hòu)加入0.2ml MDA檢測工作液。

b. 混匀後，100℃或沸(fèi)水(shuǐ)浴(yù)加熱(rè)15分(fēn)鐘。加(jiā)熱(rè)時務(wù)必注意(yì)避(bì)免液(yè)體暴沸濺出(chū)。如(rú)果使用加熱(rè)塊(kuài)(Heat block)進行加(jiā)熱(rè)注(zhù)意(yì)用(yòng)重物(wù)壓(yā)緊離心管蓋(gài)
；如果使用(yòng)沸水(shuǐ)浴(yù)，則需使用(yòng)可把(bǎ)蓋(gài)子鎖(suǒ)死(sǐ)的離心(xīn)管或(huò)螺(luó)旋蓋離(lí)心管，或用Parafilm封住離(lí)心管(guǎn)口，用針(zhēn)頭刺(cì)一(yī)小孔。zui方便和準確的加(jiā)熱方法是使用帶有熱(rè)蓋(gài)並可以(yǐ)加熱0.5ml PCR管的(dí)PCR儀(yí)。

c. 水浴冷(lěng)卻至(zhì)室溫，1000g室(shì)溫離心(xīn)10分鐘。取200微升(shēng)上清加(jiā)入(rù)到96孔(kǒng)板(bǎn)中(zhōng)，隨(suí)後用(yòng)酶標儀在(zài)532nm測(cè)定吸(xī)光度(dù)。如(rú)果不(bù)方(fāng)便測定532nm的(dí)吸(xī)光度(dù)，也可以測定530-540nm之間的吸(xī)光度。可以(yǐ)設定450nm為參考(kǎo)波長(cháng)進(jìn)行雙(shuāng)波長(cháng)測(cè)定(dìng)。

d. MDA含量的計算(suàn)：對(duì)於(yú)血(xiě)漿，血(xiě)清或(huò)尿液等樣(yàng)品可以(yǐ)直(zhí)接(jiē)根(gēn)據標準曲綫計(jì)算獲(huò)得MDA的摩爾濃度，對於細胞，或組織樣品(pǐn)，計算(suàn)出樣(yàng)品(pǐn)溶(róng)液中的MDA含量後，可(kě)以(yǐ)通過單位(wèi)重量的蛋(dàn)白(bái)含量(liáng)或(huò)組(zǔ)織重量等(děng)來表示最(zuì)初(chū)樣品中的MDA含量，例(lì)如μmol/mg蛋白(bái)或μmol/mg組(zǔ)織(zhī)。

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