限製(zhì)性(xìng)內(nèi)切(qiē)酶(méi)（restriction endonuclease，REases）是一種能夠識(shí)別(bié)雙鏈DNA分子中特定核(hé)苷(gān)酸(suān)序(xù)列，並在特(tè)定位置切割DNA鏈(liàn)中的(dí)磷酸二(èr)酯鍵的(dí)一(yī)類酶(méi)，簡稱限製(zhì)酶(méi)。下麵(miàn)讓我們(mén)一(yī)起(qǐ)來(lái)看看(kàn)NEB限製性(xìng)內(nèi)切酶(méi)AlwI(R0513S)的(dí)產(chǎn)品介(jiè)紹(shào)吧(bā)！

NEB限製性(xìng)內(nèi)切(qiē)酶AlwI是一(yī)種可識別(bié)GGATCNNNN^N_ 序(xù)列的限(xiàn)製性(xìng)內切(qiē)酶，來(lái)源於(yú)大(dà)腸杆菌(jūn)菌株(zhū)，攜(xié)帶(dài)有克(kè)隆(lóng)自(zì)洛(luò)菲不動杆菌(jūn)（Acinetobacter lwoffii）（R. Morgan）的 AlwI 基因。NEB酶(méi)AlwI 切割產生的(dí) DNA 片(piàn)段(duàn)含有單鹼基突出(chū)的 5´ 末端，它比(bǐ)平末端(duān)更難(nán)連接(jiē)。該酶(méi)對(duì)dcm甲(jiǎ)基(jī)化(huà)和CpG甲(jiǎ)基化不敏(mǐn)感，dam 甲基化(huà)阻(zǔ)斷該酶(méi)酶(méi)切。對於(yú)不(bù)能熱失活的(dí)酶，NEB建議(yì)進行柱(zhù)純化(huà)，或脂(zhī)糖凝膠(jiāo)電(diàn)泳(yǒng)後切(qiē)膠(jiāo)回(huí)收(shōu)，或酚/氯仿抽提(tí)。

優化(huà)限製性(xìng)核酸內切酶反應(yīng)：

在建立限製性(xìng)核酸內切酶消(xiāo)化物時，需要考慮(lǜ)幾個關(guān)鍵因素。在正確的反(fǎn)應體(tǐ)積(jī)中使用(yòng)適(shì)量(liáng)的(dí)DNA，酶(méi)和(hé)緩(huǎn)衝液(yè)組(zǔ)分，可以(yǐ)達到(dào)最佳(jiā)消(xiāo)化效(xiào)果(guǒ)。根(gēn)據定(dìng)義，1 單位的(dí)限(xiàn)製(zhì)性(xìng)內(nèi)切酶將在 60 分鐘內在 50 μl 反應(yīng)中wan全消化 1 μg 底(dǐ)物 DNA。這種(zhǒng)酶(méi)：DNA：反(fǎn)應體(tǐ)積比可(kě)用(yòng)作設計(jì)反(fǎn)應(yīng)的(dí)指(zhǐ)南(nán)。然而，大多數(shù)研(yán)究人(rén)員遵(zūn)循列出的(dí)“典型"反應條件，建(jiàn)議過(guò)度消化(huà) 5-10 倍，以克服 DNA 來源，數(shù)量和(hé)純度的(dí)可變性(xìng)。

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