Elabscience乙醛(quán)脫氫酶(méi)(ALDH)比色法(fǎ)測(cè)試盒適用於(yú)檢測動物(wù)組(zǔ)織，血清(漿(jiāng))等(děng)樣本(běn)中(zhōng)乙醛(quán)脫(tuō)氫酶(ALDH)的活(huó)力。

檢測原(yuán)理：

酒精代(dài)謝(xiè)的主要途(tú)徑(jìng)是乙醇脫氫(qīng)酶(ADH)氧化成(chéng)乙醛，然後是(shì) NADH 依(yī)賴的乙醛脫氫酶(ALDH)氧化成(chéng)乙酸。本(běn)試劑(jì)盒檢測原理是底物在(zài)乙醛脫(tuō)氫酶的(dí)作用(yòng)下，將(jiāng) NAD+轉化為(wéi)NADH，NADH在電(diàn)子耦合劑(jì)的(dí)作用(yòng)下(xià)使WST-8 顯橙(chéng)黃色(sè)，通過測定(dìng)450 nm下吸光(guāng)值(zhí)變化(huà)可測得乙醛(quán)脫(tuō)氫酶活(huó)性。

樣(yàng)本準(zhǔn)備(bèi)：

① 樣(yàng)本處理

血(xiě)清(qīng)(漿(jiāng))樣本：直(zhí)接測定(dìng)。組織樣(yàng)本：組織樣本使用生(shēng)理鹽水(shuǐ)(0.9% NaCl)匀漿(jiāng)處理。離(lí)心後(hòu)取上清(qīng)進(jìn)行(háng)測定，部分(fēn)上清樣本用(yòng)於(yú)蛋白濃(nóng)度(dù)測定。

② 樣本的(dí)稀(xī)釋

在(zài)正(zhèng)式檢測前(qián)，需選(xuǎn)擇(zé)2-3個(gè)預期差異大(dà)的樣(yàng)本稀釋成不同(tóng)濃(nóng)度進行預實(shí)驗，根據預實驗(yàn)的(dí)結果，結合(hé)本試(shì)劑盒的(dí)綫性範(fàn)圍(wéi)：0.01–10.0 U/L。

操作步驟：

① 標(biāo)準孔(kǒng)：取20μL 不同(tóng)濃(nóng)度的標準(zhǔn)品溶液加(jiā)入(rù)相(xiāng)應(yīng)的酶(méi)標孔中。

測定(dìng)孔(kǒng)：取(qǔ)20μL 待(dài)測樣本加入測定孔中(zhōng)。

② 向步(bù)驟①中(zhōng)各(gè)孔依次加(jiā)入160μL 反(fǎn)應(yīng)工作液。

③ 向步(bù)驟②中各孔(kǒng)依次加入20μL 試(shì)劑(jì)四。

④ 振板(bǎn)3 s，室溫(wēn)避(bì)光(guāng)靜(jìng)置5 min，酶(méi)標(biāo)儀450 nm下檢測各(gè)測(cè)定孔(kǒng)初始(shǐ)OD值(zhí) A1。

⑤ 37°C下(xià)避光孵育反(fǎn)應(yīng)45 min。

⑥ 酶(méi)標儀於(yú) 450 nm 波長檢測(cè)各測定孔OD值A2和各標準孔(kǒng)OD值，計算(suàn)測(cè)定孔變(biàn)化(huà) OD 值(zhí)△A (注：△A = A2- A1，標(biāo)準孔隻需(xū)要檢測A2值(zhí))。

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