產品名稱：NEB Q5定點突變試劑(jì)盒-不(bù)含感受態(tài)細胞(E0552S)現(xiàn)貨(huò)供應

產品貨號：E0552S

產品(pǐn)品(pǐn)牌(pái)：NEB

產品簡介：

Q5定(dìng)點(diǎn)突變試劑(jì)盒(hé)（不(bù)含感(gǎn)受態細胞）可以在(zài)2小時內快速(sù)對雙鏈(liàn)質粒(lì)DNA進行定(dìng)點突變。該(gāi)試劑盒使(shǐ)用穩(wěn)定(dìng)的Q5熱啟(qǐ)動(dòng)超(chāo)保真(zhēn)DNA聚(jù)合酶(méi)，結合客戶自行設(shè)計的(dí)引物，在各種質粒(lì)中引入插入(rù)，缺失和替換突變。PCR後(hòu)將擴(kuò)增(zēng)材(cái)料直接(jiē)添(tiān)加(jiā)到(dào)du特的激(jī)酶(méi)-連(lián)接酶(méi)-DpnI（KLD）酶混合液中，進行(háng)快速(sù)室溫(wēn)環化(huà)和(hé)模(mó)板去(qù)除（5分鐘）。將(jiāng)質(zhì)粒轉化(huà)到高效(xiào)級E.coli感(gǎn)受態(tài)細胞（不(bù)隨試劑盒(hé)提供），以確(què)保轉(zhuǎn)化長度至(zhì)少(shǎo)為20kb的質(zhì)粒能(néng)獲得穩定的結果(guǒ)。也(yě)提(tí)供含感受(shòu)態(tài)細胞(bāo)的試劑盒

實驗(yàn)數據(jù)：

使(shǐ)用(yòng)預(yù)混(hùn)液，du特(tè)的(dí)多酶(méi) KLD 酶混合液和快速聚(jù)合酶可確保大(dà)多數質(zhì)粒的突(tū)變(biàn)反(fǎn)應在(zài)兩(liǎng)小(xiǎo)時(shí)內(nèi)完成(chéng)。

注(zhù)意事(shì)項：

1.如(rú)果(guǒ)得(dé)到(dào)的質粒(lì)不包含所(suǒ)需的突變(biàn)（野(yě)生(shēng)型序(xù)列），建議在(zài)PCR步(bù)驟中使用≤10ng的模板(bǎn)。另外，也可將(jiāng)KLD溫(wēn)育(yù)時(shí)間(jiān)延(yán)長至30-60分(fēn)鐘來減少野生(shēng)型質粒(lì)的(dí)背景。

2.如(rú)果沒(méi)有菌落或菌落很(hěn)少，請確保引物設計正(zhèng)確。除引(yǐn)入(rù)缺(quē)失外(wài)，設計的(dí)兩條引物(wù)的(dí)5´末(mò)端應背靠背(bèi)對齊(qí)，以利(lì)於(yú)進行(háng)指(zhǐ)數擴增。為得到(dào)最(zuì)佳結果，推(tuī)薦使用NEB在綫引(yǐn)物設(shè)計(jì)軟(ruǎn)件NEBaseChanger™設計引物(wù)並計算(suàn)退火溫度。

3.如果(guǒ)沒有(yǒu)PCR產物或(huò)產(chǎn)物很少(shǎo)，請確保(bǎo)使(shǐ)用了(liǎo)最佳退火溫度（Ta）。高(gāo)保(bǎo)真(zhēn)聚合(hé)酶適(shì)合(hé)Tm+3退火(huǒ)溫度。使用NEB在綫引物設計(jì)軟(ruǎn)件(jiàn)NEBaseChanger™計(jì)算Ta。另外，可以使(shǐ)用梯度(dù)PCR和(hé)瓊(qióng)脂(zhī)糖凝膠分(fēn)析(xī)來(lái)確(què)定最(zuì)佳退火溫度。

產品選購：

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