CCK-8檢(jiǎn)測實(shí)驗（細(xì)胞(bāo)活力(lì)檢(jiǎn)測(cè)實(shí)驗(yàn)）是一種(zhǒng)常用的細胞增(zēng)殖(zhí)和(hé)毒(dú)性(xìng)檢(jiǎn)測方法(fǎ)，通過測量細胞內(nèi)酶活(huó)性(xìng)的(dí)變(biàn)化，從而來評(píng)估細(xì)胞的(dí)活力(lì)。CCK-8檢(jiǎn)測是一種簡便，快速，高(gāo)靈敏(mǐn)度的(dí)細胞(bāo)活力檢測方法(fǎ)，適用於多種(zhǒng)細胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)條(tiáo)件(jiàn)。本文(wén)主(zhǔ)要(yào)從(cóng)實驗原理(lǐ)，實(shí)驗(yàn)步(bù)驟(zhòu)，注(zhù)意事(shì)項等方麵來介紹該(gāi)實驗。

一(yī)，實(shí)驗原理(lǐ)

該試(shì)劑中(zhōng)含有(yǒu)WST-8，它(tā)在電(diàn)子載體（1-Methoxy PMS）的(dí)作(zuò)用(yòng)下被細(xì)胞(bāo)綫粒(lì)體(tǐ)中的(dí)脫氫(qīng)酶(méi)還原(yuán)為具有高(gāo)度(dù)水溶性的(dí)黃色甲瓚染料formazan，生成的甲瓚(zàn)物formazan的數量與(yǔ)活細胞(bāo)的數量(liáng)成正(zhèng)比，因此可(kě)以用這一特性直接(jiē)進行(háng)細(xì)胞增殖和(hé)毒性(xìng)分析。

活力(lì)計算(suàn):

細胞活力(lì)＊(%）=[A(加藥(yào))—A（空(kōng)白）]/［A（0加藥(yào)）—A（空(kōng)白）] ×100

A（加藥(yào)）：具(jù)有細胞，CCK8溶液和藥(yào)物(wù)溶液(yè)的孔(kǒng)的(dí)吸光(guāng)度(dù)

A（空(kōng)白(bái)):具有培(péi)養基和CCK8溶(róng)液而沒有(yǒu)細(xì)胞的孔(kǒng)的吸光(guāng)度(dù)

A（0加(jiā)藥）:具有(yǒu)細胞(bāo)，CCK8溶液(yè)而沒有(yǒu)藥(yào)物(wù)溶(róng)液的孔的(dí)吸(xī)光(guāng)度

*細(xì)胞活力：細胞(bāo)增殖活力(lì)或細胞(bāo)毒性(xìng)活力(lì)。

二(èr)，實(shí)驗(yàn)步(bù)驟(zhòu)

1. 實驗(yàn)前(qián)將(jiāng)細胞(bāo)接種96孔板，每組(zǔ)鋪5個平行孔（孔(kǒng)的外圍(wéi)一(yī)圈(quān)加PBS，以防邊緣效應影(yǐng)響實(shí)驗(yàn)組），在(zài)96孔(kǒng)板中(zhōng)配置(zhì)100μl的細胞(bāo)懸液，將培養板(bǎn)在(zài)培養箱(xiāng)預培養24小時。

2. 進行(háng)CCK-8實(shí)驗，棄掉孔內原有(yǒu)培養基(jī)並(bìng)每孔(kǒng)加入(rù)新配(pèi)製的(dí)含有終體積(jī)1/10 CCK-8試(shì)劑盒的(dí)完quan培養(yǎng)基，37℃細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)箱內孵(fū)育1-4hr（根(gēn)據細胞量決(jué)定時(shí)間(jiān)長短(duǎn)，細(xì)胞越(yuè)多OD值越大且(qiě)隨(suí)著孵育時(shí)間(jiān)的(dí)延長OD值也會(huì)變(biàn)大，最(zuì)適OD值應(yīng)保(bǎo)持(chí)在2以內(nèi)）。

3. 在450nm處測定(dìng)吸光(guāng)值(zhí)。

4. 計(jì)算細胞增殖率：（實(shí)驗(yàn)組OD-空白(bái)組(zǔ)OD）/（對照(zhào)組OD-空(kōng)白組OD）

三，注意(yì)事項

1. 細(xì)胞接(jiē)種(zhǒng)密度(dù)要適中(zhōng)，過(guò)低或(huò)過高的(dí)密度都(dū)會影(yǐng)響實驗(yàn)結果的(dí)準確性(xìng)。

2. CCK-8試劑的添(tiān)加量要適量(liáng)，過多或過少都(dū)會(huì)影響(xiǎng)實驗(yàn)結(jié)果。

3. 培養時間要適(shì)當，過長或過短的(dí)培養時間都可能導(dǎo)致(zhì)實(shí)驗結(jié)果的偏差(chà)。

4. 測(cè)定吸光度(dù)時，要確保(bǎo)酶標儀的校(xiào)準準確，以(yǐ)獲得可靠的(dí)實驗數(shù)據(jù)。

5.如(rú)果待測物質有(yǒu)氧化性或(huò)還原(yuán)性的(dí)話(huà)，可(kě)在加CCK8之前(qián)更換(huàn)新鮮(xiān)培養(yǎng)基（除(chú)去培養(yǎng)基，並用培養基(jī)洗滌細胞兩次(cì),然(rán)後(hòu)加(jiā)入新(xīn)的培養(yǎng)基(jī)），去(qù)掉藥物影(yǐng)響(xiǎng)。當(dāng)然(rán)藥物(wù)影(yǐng)響(xiǎng)比較小(xiǎo)的情況下,可以不更(gēng)換培(péi)養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中(zhōng)加入藥物(wù)後的空(kōng)白(bái)吸(xī)收即(jí)可。

天津益(yì)元利康(kāng)生物科技有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司提供(gōng)，助(zhù)力您(nín)的(dí)CCK-8檢測實驗(yàn)，歡(huān)迎咨詢，歡(huān)迎選購(gòu)！