一(yī)，重(zhòng)組(zǔ)蛋白

重組(zǔ)蛋白（recombinant protein）是指應用重組(zǔ) DNA 或(huò)重(zhòng)組(zǔ) RNA 技術而(ér)獲得的蛋白質
。重組蛋白工程先應用基因(yīn)克(kè)隆或化學合成技術(shù)獲得目的基因(yīn)（gene of interest，GOI），連(lián)接(jiē)到適合的表達(dá)載(zǎi)體(tǐ)，導入到特定的(dí)宿主細(xì)胞，利(lì)用(yòng)宿(sù)主細(xì)胞的(dí)遺(yí)傳(chuán)係統，表(biǎo)達出(chū)有功能的蛋白質分(fēn)子
。重組蛋(dàn)白的正確溶解(jiě)步驟包括離(lí)心，溶解(jiě)和（可能(néng)的話）進一步(bù)處理(lǐ)
。

二(èr)，重(zhòng)組(zǔ)蛋白(bái)溶解步驟一

開(kāi)蓋前(qián)離心試(shì)劑(jì)管(guǎn)
。凍(dòng)幹(gān)粉在運(yùn)輸過程中可(kě)能會(huì)因(yīn)顛簸(bò)而(ér)漂(piāo)散並粘(nián)貼(tiē)於管壁(bì)或管蓋上(shàng)，所(suǒ)以(yǐ)在打開(kāi)塑料瓶(píng)蓋前，需將凍幹粉通過離心收(shōu)集到管(guǎn)底，以(yǐ)便(biàn)用很(hěn)小(xiǎo)體(tǐ)積的(dí)液體(tǐ)即可(kě)將凍幹粉wan全溶(róng)解
。一般需要(yào)3000-3500rpm離(lí)心5min，效(xiào)果良好
。如果(guǒ)沒有高(gāo)速離(lí)心機(jī)，可(kě)以(yǐ)使(shǐ)用較(jiào)低(dī)的(dí)轉(zhuǎn)速進行(háng)較(jiào)長時間(jiān)的離心
。

‌三(sān)，重組(zǔ)蛋(dàn)白(bái)溶解步驟(zhòu)二

用無菌(jūn)水重懸至0.1-1.0 mg/ml，不可振蕩(dàng)
。這(zhè)個步驟即(jí)為(wéi)溶解步驟(zhòu)，非(fēi)常重(zhòng)要
。使(shǐ)用(yòng)推薦的溶(róng)液(yè)將凍(dòng)幹粉(fěn)重懸(xuán)至(zhì)適當的濃度
。對(duì)於短期(qī)實(shí)驗（<=7天(tiān)），建議的濃(nóng)度不低於(yú)100 μg/mL
。對於(yú)長(cháng)期(qī)實驗(yàn)（>=7天(tiān)），需要(yào)使用(yòng)含(hán)載(zǎi)體蛋白（如BSA，HSA，FBS或(huò)海(hǎi)藻糖）的溶液進(jìn)一步(bù)稀(xī)釋(shì)，然後(hòu)分裝凍(dòng)存於(yú)-20°C至(zhì)-80°C
。一定(dìng)要用(yòng)推(tuī)薦(jiàn)的(dí)溶液(yè)重懸(或溶解)凍幹粉
。蛋白的溶(róng)解性與很多(duō)因素(sù)有(yǒu)關(guān)，其(qí)中比較重要的是(shì)pH值(zhí)和(hé)離(lí)子(zǐ)強度(dù)
。產品說明(míng)上(shàng)所標(biāo)明的溶(róng)解液(yè)是能夠(gòu)將該細胞(bāo)因子(zǐ)或(huò)重組蛋(dàn)白wan全(quán)溶(róng)解的液(yè)體
。如(rú)果(guǒ)您所用(yòng)的(dí)溶解液的pH值和離(lí)子強度與(yǔ)說(shuō)明書(shū)中所標明(míng)的(dí)不符(fú)，很多(duō)時候會造(zào)成細(xì)胞因子(zǐ)或(huò)重組蛋(dàn)白(bái)不能wan全(quán)溶(róng)解或者根本無法(fǎ)溶解，這(zhè)樣(yàng)所配(pèi)得的細(xì)胞(bāo)因子(zǐ)或重組蛋白必然(rán)活(huó)性(xìng)不夠(gòu)或喪失(shī)
。

四(sì)，重(zhòng)組蛋(dàn)白(bái)溶解步驟三

該重懸液(yè)在2-8℃最(zuì)長(cháng)可保(bǎo)存(cún)1周
。用(yòng)說明書(shū)上推(tuī)薦的溶液將(jiāng)細(xì)胞因(yīn)子(zǐ)或(huò)重(zhòng)組蛋(dàn)白(bái)重懸到(dào)推薦(jiàn)的濃度(dù)後(hòu)，細胞因(yīn)子(zǐ)或重組(zǔ)蛋(dàn)白可放置(zhì)在2-8℃，即冰(bīng)箱的(dí)冷藏(cáng)室
。在這種條(tiáo)件下(xià)，細胞因子或重(zhòng)組蛋白的活性最(zuì)長(cháng)可(kě)保(bǎo)持1周(zhōu)
。這對一個周(zhōu)期(qī)為5-7天(tiān)的實驗(yàn)，如(rú)DC(樹突狀細(xì)胞)的(dí)誘(yòu)導(dǎo)成(chéng)熟(shú)是足夠的
。在(zài)此期(qī)間(jiān)，隻(zhī)要(yào)每(měi)次從(cóng)冰箱(xiāng)裏吸取(qǔ)一定量的細(xì)胞(bāo)因子或重組(zǔ)蛋(dàn)白(bái)溶液加(jiā)入到(dào)培(péi)養體(tǐ)係(xì)內即可(kě)
。

其實，說明書(shū)上(shàng)推(tuī)薦(jiàn)的濃(nóng)度對於一般(bān)的實(shí)驗來(lái)講是(shì)比較(jiào)高的
。所以用(yòng)戶通常(cháng)會(huì)將(jiāng)該(gāi)溶液(yè)進(jìn)一步(bù)稀釋後再放在4℃保存(cún)，待(dài)1周內用(yòng)完(wán)
。如進(jìn)行(háng)稀(xī)釋，必須遵照下麵第(dì)4步(bù)的(dí)方法，即(jí)需(xū)用(yòng)含(hán)載體蛋白的(dí)溶(róng)液進行稀(xī)釋，否則(zé)稀(xī)釋後的細胞(bāo)因子或(huò)重(zhòng)組蛋白(bái)很(hěn)容易(yì)會粘(nián)附(fù)在管(guǎn)壁(bì)或(huò)瓶(píng)壁上，使(shǐ)得(dé)溶液中(zhōng)的(dí)細胞因子(zǐ)或(huò)重(zhòng)組(zǔ)蛋(dàn)白(bái)的濃(nóng)度(dù)下降，細(xì)胞因子或(huò)重組蛋白的總活(huó)性(xìng)則大(dà)為減弱(ruò)
。

五(wǔ)，RD重組Monkeypox蛋白(bái)產(chǎn)品(pǐn)推(tuī)薦

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