一(yī)，感(gǎn)受態(tài)細胞

即受(shòu)體(tǐ)細胞通過理(lǐ)化方法處(chǔ)理(lǐ)，使(shǐ)其(qí)處於最(zuì)適(shì)攝(shè)取(qǔ)和容(róng)納外來(lái)DNA的生(shēng)理狀態的細胞(bāo)
。

二(èr)，感受態細胞製(zhì)備原理(lǐ)

將快(kuài)速(sù)生(shēng)長的大腸杆菌(jūn)置(zhì)於(yú)經低溫(wēn)0℃預處(chǔ)理的低滲氯化(huà)鈣溶(róng)液中，便(biàn)會造(zào)成(chéng)細胞膨脹（滲透作(zuò)用），同時，Ca2+會(huì)使細胞膜磷(lín)脂雙(shuāng)分子層形(xíng)成液晶結(jié)構，促使細胞外(wài)膜與內(nèi)膜間隙中的部(bù)分核(hé)酸酶解(jiě)離開來，離開(kāi)所在區域(yù)，誘(yòu)導(dǎo)細(xì)胞成為感(gǎn)受態細胞
。

大腸(cháng)杆(gān)菌DH5α感受態細胞

三，大(dà)腸杆菌(jūn)DH5α感(gǎn)受(shòu)態(tài)製備實(shí)驗(yàn)步驟

實驗(yàn)步(bù)驟一

從(cóng)-80℃冰箱(xiāng)中(zhōng)取出(chū)保種的DH5α菌(jūn)株，用(yòng)滅(miè)菌的(dí)槍頭(tóu)吸取少量保菌液加(jiā)入至合(hé)適的(dí)LB液(yè)體(tǐ)培養(yǎng)基中(zhōng)，在LB固(gù)體(tǐ)培養(yǎng)基進(jìn)行(háng)塗板處(chǔ)理(lǐ)，置(zhì)於37℃培養箱中過夜培(péi)養
。

實(shí)驗步(bù)驟(zhòu)二

次(cì)日(rì)，從LB固體(tǐ)培養基(jī)上(shàng)挑取(qǔ)濕潤，圓滑的大(dà)腸杆菌(jūn)單菌落，接種(zhǒng)於(yú)無(wú)抗生素的(dí)5ml LB液體培(péi)養(yǎng)基(jī)中(zhōng)，37℃下(xià)振蕩培養過夜，至對(duì)數(shù)生長後(hòu)期
。將該菌(jūn)懸液以1:100～1:50的比(bǐ)例接(jiē)種於(yú)100ml LB液體培養(yǎng)基中(zhōng)，37℃振蕩培養(yǎng)2-3h至OD600＝0.3-0.5左右
。（注(zhù)：此步(bù)必要時可(kě)在顯(xiǎn)微(wēi)鏡下(xià)鏡(jìng)檢(jiǎn)菌細(xì)胞是(shì)否(fǒu)形態一致，有無(wú)雜菌(jūn)汙(wū)染(rǎn)
。）

實驗步驟三

在無菌條件(jiàn)下將菌液轉(zhuǎn)移到(dào)冰(bīng)上預(yù)冷的(dí)離心(xīn)管中，冰(bīng)上放置10-30min，使培養物(wù)冷卻至(zhì)0℃，然後4℃，4000rpm/min離心10min
；

實(shí)驗步(bù)驟(zhòu)四

棄(qì)掉(diào)上(shàng)清，倒(dǎo)置(zhì)1 min，以便將培(péi)養(yǎng)液(yè)流盡(jìn)
；

實驗步(bù)驟五

用(yòng)冰預冷的0.1 mol/L的CaCl2溶液(yè)10 ml輕輕懸(xuán)浮(fú)細(xì)胞，充分混匀，冰(bīng)上(shàng)放置30 min後，4℃下(xià)4000rpm/min離(lí)心10min
；

實(shí)驗(yàn)步驟六

棄掉上清，並倒置(zhì)1 min，以(yǐ)便(biàn)最(zuì)後的培(péi)養液流盡(jìn)
；

實驗步驟七

加(jiā)入(rù)4 ml預(yù)冷含(hán)15%甘油（已滅菌(jūn)處理）的(dí)0.1 mol/L的(dí)CaCl2溶(róng)液，輕輕(qīng)懸浮(fú)細胞(bāo)，冰上(shàng)放(fàng)置幾分鐘，即(jí)成感受態細胞懸液
；

實驗(yàn)步驟八(bā)

感受態細胞100 μL分裝，標記貼標簽，貯(zhù)存於-80 ℃保存(cún)備用
。

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