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技(jì)術文章
更(gēng)新時間:2024-10-17
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一(yī),什(shí)麼是同型對照(zhào)抗體?
同型(xíng)對照(zhào)抗體(tǐ)是一種(zhǒng)與檢測(cè)抗體(tǐ)(一(yī)抗)相同(tóng)種屬,相同(tóng)種型(xíng)(和(hé)亞類),具有相(xiāng)同(tóng)標記(jì)物的(dí)但(dàn)對(duì)目標抗(kàng)原(yuán)無(wú)特(tè)異性識別(bié)能力的(dí)一抗(kàng)。
檢測(cè)抗體和(hé)同型對(duì)照抗(kàng)體(tǐ)唯(wéi)1的區(qū)別(bié)在(zài)於對待(dài)測樣本中(zhōng)目標(biāo)抗(kàng)原的特異(yì)性(xìng)識別(bié)能(néng)力(lì)。檢(jiǎn)測(cè)抗體(tǐ)能在代測樣本(běn)中(zhōng)特異性(xìng)識(shí)別(bié)並結合目標(biāo)抗原,而(ér)同型(xíng)對照抗體(tǐ)不會(huì)特異性結合任何存在待(dài)測樣本中(zhōng)的抗(kàng)原,其他屬(shǔ)性(xìng)二者是(shì)完(wán)權一(yī)致(zhì)的(dí)。
二(èr),為什麼需要同(tóng)型對(duì)照(zhào)抗體(tǐ)?
在(zài)流式細胞(bāo)術(shù)(FC)和免疫組織化學(IHC)等實(shí)驗(yàn)中,有很高的背景(jǐng)染色(sè)風險(xiǎn),我(wǒ)們(mén)會(huì)發(fā)現抗(kàng)體(tǐ)與細(xì)胞的(dí)結合(hé),可以(yǐ)通過不止抗體(tǐ)-抗原(yuán)特異(yì)性結合(hé)這(zhè)一種方式。
比如 B細(xì)胞,巨(jù)噬細胞,單核(hé)細胞和(hé)樹突狀細(xì)胞(bāo)等(děng)細胞表麵會表(biǎo)達Fc受體,它(tā)能(néng)夠非特(tè)異性結合抗體Fc端(duān),將抗體(tǐ)標記在非目(mù)標(biāo)細(xì)胞上;還有一些(xiē)脂(zhī)質(zhì)和碳水化(huà)合(hé)物等(děng),他(tā)們(mén)也可(kě)以通過(guò)非特(tè)異的(dí)方式(shì)與抗(kàng)體(tǐ)結(jié)合。這些(xiē)非特異(yì)性結合(hé)對於我(wǒ)們(mén)的實(shí)驗(yàn)而言,就(jiù)是(shì)一(yī)種幹擾信號,造成實(shí)驗結(jié)果的不(bù)準(zhǔn)確(què)甚(shèn)至錯誤。
因(yīn)此(cǐ),為了(liǎo)評(píng)估非特(tè)異(yì)性背景(jǐng)信(xìn)號(hào)對染色結(jié)果的(dí)貢(gòng)獻(xiàn)並區分非(fēi)特異性和特異性抗體染(rǎn)色(sè),同型(xíng)對照是非常(cháng)有必(bì)要(yào)的。
三,如何選(xuǎn)擇和(hé)使用(yòng)同(tóng)型(xíng)對照(zhào)抗(kàng)體?
在選(xuǎn)擇上,同型(xíng)對(duì)照(zhào)抗體(tǐ)必須與所(suǒ)使用的(dí)檢(jiǎn)測(cè)抗體(一抗)的相匹(pǐ)配(pèi),須(xū)來(lái)源(yuán)於相同物種,具有相(xiāng)同(tóng)種型(xíng)和Ig亞類,並(bìng)具有相同(tóng)標記(jì)物。比如(rú),如(rú)果你(nǐ)使用(yòng)PE標(biāo)記的兔重組(zǔ)單克隆抗體,那(nà)你(nǐ)應(yīng)該使(shǐ)用PE偶(ǒu)聯(lián)的(dí)兔(tù)IgG同(tóng)型對照抗體作為對照。
在使(shǐ)用(yòng)上,同(tóng)型(xíng)對照組用同型(xíng)對照(zhào)抗體代(dài)替一抗(kàng),其(qí)他實驗條件與(yǔ)實驗組均相同,包(bāo)括:工作濃度(μg/ml),溫度(dù),孵育(yù)和檢測方法(fǎ)。
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