買到了(liǎo)後，該如何使用(yòng)呢？

一，製劑（無(wú)菌(jūn)罩(zhào)室溫）：

1. 將80µl台普(pǔ)蘭(lán)藍（Sigma T8154）加(jiā)入(rù)0.5ml試管中(zhōng)進(jìn)行下麵(miàn)的(dí)步驟(zhòu)4。

2. 12ml NbActiv1™至室溫。

3. 將2ml分(fēn)離(lí)的初級(jí)神經(jīng)元(yuán)管(guǎn)置(zhì)於30℃水(shuǐ)浴中(zhōng)加(jiā)熱1分(fēn)鐘(zhōng)。

二(èr)，細胞分(fēn)散（無菌(jūn)罩(zhào)室溫）：

1. 用(yòng)矽化巴(bā)斯(sī)德(dé)移(yí)液管(guǎn)，將整個試(shì)管(guǎn)的內容(róng)物(wù)轉(zhuǎn)移到(dào)無(wú)菌15ml離(lí)心管(guǎn)中。

2. 旋轉1100rpm (200 x G)， 1分鐘。丟(diū)棄上清(qīng)，留下(xià)約50µl含有(yǒu)微(wēi)球(qiú)的THRYVE胚胎(tāi)wanquan液(yè)。

3. 分散細(xì)胞顆(kē)粒(lì)（用(yòng)手指或(huò)管(guǎn)輕彈(dàn)管底部），重(zhòng)懸(xuán)於1ml NbActiv1™中(zhōng)。

4. 將20µl細(xì)胞液加入含(hán)有80µl台盼藍(lán)（1:5稀釋）的0.5ml試管中。

5. 使用血(xiě)細(xì)胞計(jì)（計算(suàn)細(xì)胞(bāo)/ml）或使(shǐ)用當前(qián)的實驗室(shì)程序計(jì)數(shù)細(xì)胞。

三，細胞電鍍(dù)（無菌(jūn)罩室(shì)溫）：

1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細胞(bāo)，用16000個(gè)細胞(bāo)/cm2或(huò)所需濃度的(dí)平板(bǎn)。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度(dù)（或環境O2）孵育(yù)。

3. 4天後，神(shén)經元顯示軸突(tū)和(hé)樹突
；突觸和動作(zuò)電位(wèi)開(kāi)始於(yú)7天(tiān)。

4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更(gēng)換(huàn)一半(bàn)的培(péi)養(yǎng)基。

四(sì)，細(xì)胞鍍(dù)96孔板：

1. 用NbActiv1™以0.2ml/cm2稀釋(shì)細胞，並以(yǐ)10,000個細(xì)胞/孔（SD）和(hé)35,000個(gè)細胞/孔（C57/BL6）或所需的濃(nóng)度進行平板(bǎn)稀釋

濃度(dù)。

2. 將鋼板放在工作(zuò)台頂(dǐng)部（而(ér)不是在引擎(qíng)蓋下），並(bìng)將(jiāng)邊(biān)緣(yuán)用(yòng)薄(báo)膜(mó)包(bāo)裹15-20分鐘(zhōng)，使(shǐ)其(qí)均匀(yún)沉降。

3. 除去副(fù)膜，37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度(dù)（或環境(jìng)O2）孵育。

4. 4天(tiān)後(hòu)，神(shén)經元(yuán)顯示(shì)軸(zhóu)突和(hé)樹突
；突觸和(hé)動作電(diàn)位開(kāi)始於7天(tiān)。

5. 每3-4天用新鮮(xiān)的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的(dí)培養(yǎng)基(jī)。

五，可(kě)行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物(wù)）衝(chōng)洗兩(liǎng)次。

2. 用(yòng)15mg/ml雙醋(cù)酸熒光(guāng)素的(dí)丙酮(tóng)原(yuán)液(yè)和(hé)4.6mg/ml碘化(huà)丙啶(dìng)的水(shuǐ)原液(yè)配製染(rǎn)料混合物(wù)。

將每種15µl稀釋(shì)到(dào)1.5ml HBSS中（1:100稀(xī)釋(shì)）。

3. 在(zài)步驟(zhòu)1中加(jiā)入的0.2ml HBSS中加(jiā)入(rù)20µl染料(liào)混(hùn)合(hé)物(wù)（1:10稀(xī)釋(shì)）。

4. 約(yuē)1分鐘後(hòu)，使用適合熒光素(sù)熒光的藍色激勵（綠色細胞(bāo)）計數(shù)活細(xì)胞。計數死細(xì)胞

綠色(sè)激(jī)發為碘化丙(bǐng)啶熒(yíng)光（小紅核(hé)）。

5. 生存能(néng)力(lì)=（綠色(sè)細(xì)胞/單位麵(miàn)積）/（總(zǒng)細(xì)胞(bāo)數(shù)/單位麵積）或生存=綠色細胞/（綠色(sè)+紅(hóng)色(sè)細(xì)胞）。

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