takara一(yī)步法(fǎ)RT-qPCR說(shuō)明書(shū)

更(gēng)新時(shí)間：2024-12-11

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一，產品(pǐn)目(mù)錄表(biǎo)

品牌	Code No.	產品(pǐn)名稱	包裝量(liáng)	價(jià)格(gé)（元(yuán)）
Takara	RR600A	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix	200 Rxns	詳(xiáng)詢
Takara	RR600B (A × 5)	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix	200 Rxns × 5	詳(xiáng)詢(xún)
Takara	RR601A	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG	200 Rxns	詳詢
Takara	RR601B (A × 5)	One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG	200 Rxns × 5	詳詢

二(èr)，產(chǎn)品(pǐn)特點

· wan全premix型，操作簡(jiǎn)單，probe法One Step RT-qPCR。
· zuo越(yuè)的抗(kàng)反(fǎn)應阻礙(ài)物(wù)能力(lì)，粗提(tí)樣(yàng)品可以(yǐ)使用本產(chǎn)品(pǐn)
· 新增UNG版本，可防止(zhǐ)假陽(yáng)性產生(shēng)

■ 製(zhì)品內容

One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix (Code No.: RR600A，200次(cì)，25 μl反應體(tǐ)係(xì))

1. One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix（2×）	625 μl × 4
2. RNase Free Water	1.25 ml × 2
3. ROX Reference Dye（50×conc.）*	100 μl
4. ROX Reference Dye II（50×conc.）*	100 μl

One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix with UNG (Code No.: RR601A，200次，25 μl反(fǎn)應體係)
1. One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG（2×）	625 μl × 4
2. RNase Free Water	1.25 ml × 2
3. ROX Reference Dye（50×conc.）*	100 μl
4. ROX Reference Dye II（50×conc.）*	100 μl

* 使用(yòng)Applied Biosystems Real-Time PCR儀器(qì)等，需(xū)要(yào)進(jìn)行孔(kǒng)與(yǔ)孔(kǒng)之(zhī)間的熒光信號(hào)校(xiào)正(zhèng)時添加(jiā)該試劑。

◆ 需要(yào)使用ROX Reference Dye (50×) 校(xiào)正的(dí)儀器 Applied Biosystems 7900HT/7300 Real-Time PCR System StepOnePlus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ◆ 需(xū)要(yào)使用ROX Reference Dye II (50×) 校(xiào)正(zhèng)的(dí)儀器(qì) Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ◆ 不(bù)需要使(shǐ)用(yòng)ROX Reference Dye校(xiào)正(zhèng)的儀(yí)器(qì) Thermal Cycler Dice Real Time System係列(liè) LightCycler/LightCycler 480 system (Roche Diagnostics) CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad)

■ 製品說明(míng)

反(fǎn)應阻害物(wù)耐受實驗(yàn)

圖1．阻害物耐受(shòu)實驗

在反應液中添加(jiā)5種(zhǒng)反應(yīng)阻害(hài)物，分別使(shǐ)用One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix，Takara以往產品及其(qí)他(tā)公司(sī)的(dí)產(chǎn)品(pǐn)進行(háng)阻害物質(zhì)耐(nài)受(shòu)實(shí)驗。結果表明(míng)，使用One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix對添加(jiā)各種(zhǒng)阻(zǔ)害物質(zhì)和(hé)無添(tiān)加組(zǔ)比較(jiào)，Ct值之間的差(chà)值(zhí)很小，顯示(shì)該製品對於(yú)各(gè)種阻(zǔ)害物具有很高的(dí)耐受(shòu)性(xìng)。

target	Human ACTB基因(yīn)
探(tàn)針(zhēn)	Takara qPCR Probe

圖2．Multiplex反應(yīng)的(dí)再現性(xìng)

以Human HeLa Cell Total RNA 1 pg～100 ng為(wéi)模(mó)板，使用(yòng)One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix對(duì)ACTB，GAPDH，PPIA，YWHAZ基因(yīn)進(jìn)行(háng)multiplex表達(dá)分(fēn)析(xī)。對於所有目標(biāo)序列(liè)，滿足(zú)R2＞0.99。

Standard

- Actin E = 97.1％ R2= 0.996 Slope=-3.393 y-int=33.278

- YWHAZ E = 95.6％ R2= 0.997 Slope=-3.433 y-int=35.528

- GAPDH E = 100.6％ R2= 1.000 Slope=-3.307 y-int=35.400

- PPIA E = 97.1％ R2= 0.999 Slope=-3.395 y-int=33.800

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