一，產(chǎn)品(pǐn)簡介

活性(xìng)氧檢測(cè)試劑盒(hé)(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也稱ROS Assay Kit)是一(yī)種利用(yòng)熒(yíng)光探(tàn)針(zhēn)DCFH-DA進行活性氧檢測(cè)的(dí)試劑盒。DCFH-DA本(běn)身沒有熒光(guāng)，可以(yǐ)自由(yóu)穿過細(xì)胞(bāo)膜(mó)，進入細胞(bāo)內(nèi)後，可以被細胞(bāo)內(nèi)的酯(zhǐ)酶(méi)水(shuǐ)解(jiě)生成DCFH。而DCFH不能(néng)通(tōng)透細胞膜，從而使探(tàn)針(zhēn)很(hěn)容易(yì)被(bèi)裝(zhuāng)載到(dào)細胞(bāo)內(nèi)。細胞內(nèi)的活性(xìng)氧可(kě)以氧化無熒(yíng)光的DCFH生(shēng)成有熒光(guāng)的(dí)DCF。檢(jiǎn)測(cè)DCF的熒光就可以知(zhī)道(dào)細胞內(nèi)活性(xìng)氧(yǎng)的水平(píng)。

——天津(jīn)益(yì)元利康(kāng)生(shēng)物科技有限公(gōng)司(sī)

本(běn)試(shì)劑(jì)盒提(tí)供了(liǎo)活性氧陽性對照試劑Rosup，以(yǐ)便(biàn)於活性(xìng)氧的檢測。Rosup是一(yī)種混(hùn)合物(wù)(compound mixture),濃度為(wéi)50mg/ml。使用本試劑盒(hé)檢測(cè)細(xì)胞內活(huó)性(xìng)氧的效果(guǒ)請參考(kǎo)圖(tú)1。
圖1. 碧雲(yún)天活(huó)性(xìng)氧(yǎng)檢測(cè)試劑(jì)盒(hé)(S0033)檢測(cè)L929 (小(xiǎo)鼠成(chéng)纖維細胞(bāo))細(xì)胞內活(huó)性(xìng)氧的(dí)效果(guǒ)圖。L929細(xì)胞裝(zhuāng)載DCFH-DA探針(zhēn)後用50μg/ml Rosup處理(lǐ)30分(fēn)鐘(zhōng)，隨後PBS洗滌(dí)一(yī)次後用(yòng)熒光顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)(圖(tú)A)檢測。正常(cháng)的L929細胞中(zhōng)探針(zhēn)幾乎未(wèi)被(bèi)氧化(huà)成熒(yíng)光化合物，細胞中的(dí)綠(lǜ)色熒光非(fēi)常弱(ruò)；使(shǐ)用活(huó)性氧(yǎng)陽性(xìng)對(duì)照(zhào)試(shì)劑Rosup處理(lǐ)使細胞(bāo)內(nèi)活性(xìng)氧生成大幅(fú)增加，DCFH-DA與(yǔ)活(huó)性(xìng)氧(yǎng)反應，細(xì)胞(bāo)中(zhōng)的(dí)綠(lǜ)色熒(yíng)光顯(xiǎn)著(zhù)增(zēng)強。實際(jì)結(jié)果會(huì)因實(shí)驗(yàn)條(tiáo)件(jiàn)，檢測儀(yí)器等(děng)的不(bù)同(tóng)而存(cún)在差異，圖(tú)中(zhōng)效果(guǒ)僅供(gōng)參考。
本試(shì)劑盒本底低(dī)，靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高，綫性(xìng)範圍(wéi)寬，使用方便。
本試劑盒S0033S包裝可以測(cè)定(dìng)100-500個(gè)樣(yàng)品，S0033M包(bāo)裝(zhuāng)可(kě)以測定500-2500個樣(yàng)品(pǐn)。

包裝(zhuāng)清單：

二(èr)，保存條件：
-20℃保(bǎo)存，一年(nián)有效。
三，注(zhù)意(yì)事(shì)項(xiàng)：
探針裝載後，一(yī)定(dìng)要洗(xǐ)淨(jìng)殘(cán)餘的未(wèi)進入細(xì)胞(bāo)內(nèi)的探(tàn)針(zhēn)，否則會導(dǎo)致背景較高(gāo)。
探針裝載完畢並(bìng)洗淨殘餘探(tàn)針(zhēn)後(hòu)，可以進行(háng)激發(fā)波長(cháng)的掃(sǎo)描(miáo)和發射波(bō)長的掃(sǎo)描，以(yǐ)確(què)認探針(zhēn)的(dí)裝(zhuāng)載(zǎi)情況是否良好(hǎo)。DCF的激發(fā)光(guāng)譜和發(fā)射光(guāng)譜請(qǐng)參考(kǎo)下(xià)頁圖譜(pǔ)。
盡(jìn)量縮短探針裝載後到(dào)測定所用的時(shí)間(jiān)(刺(cì)激時間除外)，以(yǐ)減(jiǎn)少各種(zhǒng)可(kě)能的誤(wù)差(chà)。
熒光酶(méi)標儀檢(jiǎn)測(cè)時須使用(yòng)適(shì)合(hé)熒光檢測的(dí)黑(hēi)板或(huò)白板(bǎn)，推薦(jiàn)使(shǐ)用碧雲天(tiān)BeyoGold™全黑(hēi)96孔細(xì)胞(bāo)培養板(FCP966)或(huò)BeyoGold™黑色透明(míng)底(dǐ)96孔(kǒng)細胞(bāo)培養板(平(píng)底帶蓋, 獨(dú)立包(bāo)裝) (FCP965)。
本(běn)產(chǎn)品(pǐn)僅限於(yú)專(zhuān)業人(rén)員的(dí)科(kē)學研(yán)究(jiū)用(yòng)，不得用(yòng)於臨床診(zhěn)斷或治(zhì)療(liáo)，不得用於食(shí)品(pǐn)或(huò)藥(yào)品(pǐn)，不(bù)得存放於普通住宅內。
為(wéi)了(liǎo)您的(dí)安全(quán)和(hé)健康，請(qǐng)穿(chuān)實驗(yàn)服並戴一(yī)次(cì)性(xìng)手套(tào)操(cāo)作。

四(sì)，使(shǐ)用(yòng)說明(míng)：
1. 裝(zhuāng)載(zǎi)探針
對於刺激(jī)時間較短(duǎn)(通常為2小時以(yǐ)內)的(dí)細胞，先裝載探針(zhēn)，後(hòu)用(yòng)活性(xìng)氧陽性對(duì)照(zhào)或自(zì)己(jǐ)感興趣(qù)的藥(yào)物刺激細胞。對於(yú)細胞(bāo)刺激(jī)時間(jiān)較(jiào)長(通常(cháng)為(wéi)6小時(shí)以上)的(dí)細(xì)胞(bāo)，先(xiān)用活性(xìng)氧陽性(xìng)對照或自(zì)己感興趣(qù)的(dí)藥(yào)物(wù)刺激細(xì)胞，後(hòu)裝載探針。
原位裝載(zǎi)探針：本方(fāng)法僅(jǐn)適(shì)用(yòng)於貼壁(bì)培(péi)養(yǎng)細胞。按照(zhào)1:1000用細胞(bāo)外液(yè)(C0216)或(huò)酌(zhuó)情(qíng)使用PBS，HBSS等(děng)適(shì)當(dāng)溶液稀釋(shì)DCFH-DA，使(shǐ)終濃(nóng)度為10微(wēi)摩爾(ěr)/升(shēng)。去除細(xì)胞培養液，加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加(jiā)入的體積以(yǐ)能(néng)充分蓋(gài)住細(xì)胞為宜(yí)，通常(cháng)對(duì)於六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少於1毫升。37ºC細(xì)胞培(péi)養(yǎng)箱內(nèi)孵育(yù)20分鐘(zhōng)。用細胞外(wài)液(yè)(C0216)或酌(zhuó)情使用(yòng)PBS，HBSS，無血(xiě)清細胞培(péi)養液(yè)等適當溶液(yè)洗滌細(xì)胞三次，以充分去(qù)除未進入細胞內的(dí)DCFH-DA。通(tōng)常活(huó)性(xìng)氧(yǎng)陽(yáng)性(xìng)對照(zhào)在刺激細(xì)胞20-30分(fēn)鐘(zhōng)後(hòu)可以顯(xiǎn)著提高(gāo)活性(xìng)氧(yǎng)水平。
收(shōu)集細(xì)胞(bāo)後裝載探針(zhēn)：按(àn)照(zhào)1:1000用細胞(bāo)外液(C0216)或酌情使(shǐ)用PBS，HBSS等適(shì)當溶液(yè)稀釋(shì)DCFH-DA，使終濃度為10微摩(mó)爾(ěr)/升(shēng)。細(xì)胞收(shōu)集後(hòu)懸浮(fú)於稀釋(shì)好的DCFH-DA中，細胞濃度為一百(bǎi)萬至二(èr)千(qiān)萬(wàn)/毫升，37ºC細(xì)胞(bāo)培養箱內(nèi)孵(fū)育20分(fēn)鐘。每隔3-5分(fēn)鐘(zhōng)顛倒混匀(yún)一(yī)下，使探(tàn)針(zhēn)和(hé)細胞充分接觸。用細(xì)胞(bāo)外液(C0216)或酌情(qíng)使用PBS，HBSS，無(wú)血(xiě)清細胞培養液(yè)等適當(dāng)溶液洗滌(dí)細(xì)胞(bāo)三次，以充分(fēn)去除未進入細(xì)胞內的(dí)DCFH-DA。直(zhí)接用(yòng)活性氧陽(yáng)性(xìng)對(duì)照(zhào)或(huò)自己(jǐ)感興趣的藥(yào)物刺(cì)激細胞，或把細胞(bāo)等分成若幹份後刺(cì)激(jī)細(xì)胞(bāo)。通(tōng)常(cháng)活(huó)性(xìng)氧(yǎng)陽性對照在刺(cì)激細(xì)胞20-30分鐘(zhōng)後可以顯著提(tí)高(gāo)活(huó)性氧水(shuǐ)平。
說明(míng)：僅(jǐn)在(zài)陽性對(duì)照(zhào)孔中加(jiā)入Rosup作(zuò)為陽性對照，其(qí)餘孔不(bù)必加(jiā)入(rù)Rosup。細胞(bāo)外液推薦使(shǐ)用(yòng)細(xì)胞(bāo)外(wài)液(Extracellular Solution) (C0216)，PBS推薦使用(yòng)PBS (C0221A)，HBSS推(tuī)薦(jiàn)使用Hanks' Balanced Salt Solution (C0218)。
2. 檢測
對(duì)於原位(wèi)裝(zhuāng)載(zǎi)探(tàn)針的樣品可(kě)以(yǐ)用激光共聚焦(jiāo)顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)直接觀察，或(huò)收集細胞後用熒光(guāng)分光光度計(jì)，熒(yíng)光酶標(biāo)儀或流(liú)式(shì)細(xì)胞儀(yí)檢測(cè)。對於(yú)收集(jí)細胞後裝(zhuāng)載探(tàn)針的樣品(pǐn)可(kě)以用(yòng)熒光分光(guāng)光度計，熒(yíng)光酶標儀(yí)或(huò)流(liú)式細胞儀檢(jiǎn)測，用激(jī)光共(gòng)聚焦顯微鏡直(zhí)接觀(guān)察也可以(yǐ)。
3. 參數(shù)設置(zhì)
使(shǐ)用488nm激(jī)發(fā)波長(cháng)，525nm發射波長(cháng)，實(shí)時或(huò)逐時間點檢測(cè)刺激(jī)前後熒光的(dí)強弱。DCF的熒(yíng)光光譜和FITC非(fēi)常(cháng)相(xiāng)似，可(kě)以(yǐ)用(yòng)FITC的參(cān)數設(shè)置檢測(cè)DCF。DCF的激發光(guāng)譜和發(fā)射(shè)光譜參考下(xià)圖。

4. 其(qí)它(tā)說明
陽(yáng)性(xìng)對照Rosup可(kě)以(yǐ)按照(zhào)1:1000的比(bǐ)例(lì)酌情使(shǐ)用PBS，HBSS，細(xì)胞外液(yè)或無(wú)血清(qīng)培養液稀釋後使(shǐ)用(yòng)。例如裝載好探(tàn)針的細(xì)胞，直接(jiē)吸(xī)除液體(tǐ)或(huò)離心後吸除(chú)液(yè)體，加(jiā)入(rù)適(shì)當體積的按照1:1000稀釋的Rosup陽(yáng)性對(duì)照(zhào)刺(cì)激。通(tōng)常(cháng)刺激後20-30分鐘(zhōng)內可以觀察到非(fēi)常顯著的(dí)活性氧水平(píng)升高。對於不同的(dí)細(xì)胞，活性(xìng)氧陽性對(duì)照的(dí)效果可能有較(jiào)大的差(chà)別。如(rú)果在(zài)刺激後(hòu)30分鐘(zhōng)內(nèi)觀(guān)察不(bù)到活性氧的(dí)升高(gāo)，可以(yǐ)適當(dāng)提高(gāo)活性(xìng)氧(yǎng)陽性(xìng)對(duì)照的(dí)濃(nóng)度。如果活(huó)性氧(yǎng)升高得過快(kuài)，可以適當降低活(huó)性氧陽性對照的濃(nóng)度(dù)。Rosup對不(bù)同細(xì)胞的(dí)效果會有(yǒu)所不同(tóng)。
另(lìng)外，對(duì)於(yú)某些細胞(bāo)，如(rú)果發現沒有刺激的陰(yīn)性對照(zhào)細胞熒光(guāng)也(yě)比較(jiào)強，可(kě)以(yǐ)按(àn)照1:2000-1:5000稀釋DCFH-DA，使裝載(zǎi)探針時DCFH-DA的(dí)濃(nóng)度為2-5微(wēi)摩爾(ěr)/升(shēng)。
探針(zhēn)裝載的(dí)時間(jiān)也可以(yǐ)根(gēn)據情(qíng)況在(zài)15-60分鐘(zhōng)內適當進行調整(zhěng)。
活性(xìng)氧陽(yáng)性對照(zhào)(Rosup)僅(jǐn)僅用於作(zuò)為陽(yáng)性對照的樣品，並(bìng)不是(shì)在每個(gè)樣品中都(dū)需加入(rù)活(huó)性氧陽(yáng)性對照。

五(wǔ)，——天津(jīn)益元(yuán)利(lì)康(kāng)生物科技有限公司(sī)

碧雲(yún)天代(dài)理(lǐ)——天(tiān)津益元利康科技有限(xiàn)公(gōng)司(sī)代理(lǐ)提(tí)供碧雲天品牌試劑盒，細胞相(xiāng)關產(chǎn)品(pǐn)，蛋白，等(děng)產品係列(liè)，歡(huān)迎咨詢(xún)！

下麵是部(bù)分產品(pǐn)列(liè)表