一，單(dān)細(xì)胞懸(xuán)液製備流程

(以一般的(dí)哺(bǔ)乳動(dòng)物(wù)組(zǔ)織(zhī)為(wéi)例(lì))

1，用滅(miè)菌的(dí)剪刀或手(shǒu)術(shù)剪將組織切成(chéng)小(xiǎo)塊(kuài),

2，在冰上將(jiāng)組(zǔ)織(zhī)塊兒加(jiā)入(rù)適(shì)當的RPMI 1640培(péi)養(yǎng)基或PBS緩(huǎn)衝(chōng)液，清(qīng)洗至(zhì)少3次(cì)，去除多餘(yú)血(xiě)*和(hé)雜貪
。

3，將洗幹淨(jìng)的組(zǔ)織剪(jiǎn)碎(suì)，剪(jiǎn)的越(yuè)碎越好，增(zēng)大和消(xiāo)化試劑接觸的麵積(jī)
。加入適量的消化試(shì)劑
。(這(zhè)裏推薦使(shǐ)用我(wǒ)公(gōng)司的(dí)哺乳(rǔ)動(dòng)物(wù)組(zǔ)織(zhī)通(tōng)用解離試劑盒(hé)，按照說(shuō)明書操(cāo)作即可
。)顛(diān)倒混
。

4，放(fàng)置(zhì)於(yú)酶作(zuò)用(yòng)的(dí)最(zuì)佳(jiā)溫度下，一(yī)般(bān)37℃℃，進行孵(fū)育，每隔(gé)5分(fēn)鐘(zhōng)震蕩混(hùn)匀(yún)
。

5，不同類(lèi)型，狀態(tài)的(dí)組織(zhī)消(xiāo)化時(shí)間不(bù)同，每隔(gé)一(yī)定(dìng)的(dí)時間(jiān)質檢一次細胞(bāo)懸(xuán)液，根據(jù)細胞總量(liáng)及(jí)活性等確(què)定(dìng)消化停止時間(jiān)
。對於(yú)某(mǒu)些(xiē)腫(zhǒng)瘤(liú)組織或(huò)其(qí)他較(jiào)致(zhì)密(mì)結(jié)締組織，消化(huà)時(shí)間4~48h，對於(yú)容(róng)易(yì)消化的(dí)組織(zhī)可以采用37℃消(xiāo)化(huà)15-45分(fēn)鐘，也可以根據具(jù)體(tǐ)情(qíng)況而定
。如組(zǔ)織塊已分散而(ér)失(shī)去(qù)塊的形(xíng)狀，一(yī)經搖動即成細(xì)胞團(tuán)或單(dān)個細胞，可以認為(wéi)已消(xiāo)化充(chōng)分(fēn)
。

6，消(xiāo)化完成後(hòu)，用合(hé)適的細(xì)胞篩進行(háng)過(guò)濾(lǜ)，收集濾(lǜ)液(yè)
。

7，讓細胞沉降並倒(dǎo)出多餘的含(hán)酶液體(tǐ)
。

8，用(yòng)PBS緩(huǎn)衝(chōng)液(yè) 洗滌並重復2-3次(cì)
。加入適當的(dí)培(péi)養基或緩衝(chōng)液(yè)，重(zhòng)懸細胞
。

9，用(yòng)細(xì)胞計數(shù)儀對(duì)細胞懸(xuán)液(yè)進行(háng)質控並記(jì)錄
。

注:若(ruò)得(dé)到(dào)的細(xì)胞懸液(yè)中(zhōng)紅細胞(bāo)，碎片和死(sǐ)細胞(bāo)過(guò)多(duō)，按(àn)需決(jué)定(dìng)是否進行相應(yīng)的(dí)去除操(cāo)作
。

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