免(miǎn)疫熒光技(jì)術(Immunofluorescence technique )又稱(chēng)熒光(guāng)抗體(tǐ)技術,是(shì)標(biāo)記免(miǎn)疫技術中(zhōng)發展最(zuì)早(zǎo)的(dí)一(yī)種。它是在免疫學,生(shēng)物化學(xué)和(hé)顯(xiǎn)微鏡(jìng)技(jì)術(shù)的(dí)基礎上(shàng)建(jiàn)立(lì)起來(lái)的(dí)一項(xiàng)技(jì)術。很早(zǎo)以(yǐ)來就有一(yī)些學者試圖將抗體(tǐ)分(fēn)子與一(yī)些(xiē)示蹤(zōng)物質結(jié)合,利(lì)用抗(kàng)原(yuán)抗體(tǐ)反應進行組織或細(xì)胞(bāo)內抗(kàng)原(yuán)物質的定位(wèi)。那麼你(nǐ)知(zhī)道免疫熒(yíng)光技術的原理是什(shí)麼(mó)嗎(má)?讓我們一起(qǐ)來(lái)看(kàn)看吧!
免(miǎn)疫學的基本反應是抗(kàng)原(yuán)-抗體(tǐ)反(fǎn)應。由(yóu)於抗原(yuán)抗體(tǐ)反(fǎn)應(yīng)具有(yǒu)高度(dù)的特異性,所以(yǐ)當抗(kàng)原(yuán)抗體發(fā)生反應時,隻要知道其(qí)中的一個(gè)因素,就可以查(chá)出另一個因(yīn)素。免疫(yì)熒(yíng)光(guāng)技(jì)術就是將(jiāng)不影(yǐng)響(xiǎng)抗原抗(kàng)體活(huó)性的熒(yíng)光(guāng)色(sè)素標記在(zài)抗(kàng)體(或抗(kàng)原)上(shàng),與其(qí)相(xiāng)應的(dí)抗(kàng)原(或(huò)抗體)結(jié)合(hé)後,在熒(yíng)光(guāng)顯(xiǎn)微鏡下(xià)呈(chéng)現一種(zhǒng)特異性熒(yíng)光(guāng)反應(yīng)。
直接(jiē)法:將標(biāo)記(jì)的特(tè)異(yì)性熒光(guāng)抗體,直接(jiē)加(jiā)在(zài)抗原標(biāo)本上(shàng),經(jīng)一(yī)定的溫度和時(shí)間的染色,用水洗(xǐ)去(qù)未參加(jiā)反(fǎn)應的(dí)多餘熒光(guāng)抗體,室溫(wēn)下幹(gān)燥後封片,鏡(jìng)檢(jiǎn)。
間(jiān)接法(fǎ):如(rú)檢查未知抗原,先(xiān)用已(yǐ)知(zhī)未標(biāo)記(jì)的特異抗體(第一抗體)與抗原標本(běn)進(jìn)行反應,用(yòng)水(shuǐ)洗去(qù)未反(fǎn)應的抗體(tǐ),再(zài)用標記的(dí)抗抗體(tǐ)(第(dì)二(èr)抗體)與抗原標本反(fǎn)應,使(shǐ)之形(xíng)成(chéng)抗(kàng)原—抗(kàng)體(tǐ)—抗體(tǐ)復合物(wù),再用水洗去未(wèi)反應(yīng)的(dí)標記(jì)抗體,幹燥(zào),封片(piàn)後(hòu)鏡檢。如果檢查(chá)未(wèi)知(zhī)抗體,則表(biǎo)明(míng)抗(kàng)原標(biāo)本(běn)是(shì)已知的,待(dài)檢血(xiě)清(qīng)為第(dì)一抗體,其它步(bù)驟的抗(kàng)原(yuán)檢(jiǎn)查相(xiāng)同(tóng)。
標記(jì)的(dí)抗抗體是(shì)抗(kàng)球(qiú)蛋白(bái)抗(kàng)體(tǐ),同(tóng)於血(xiě)清球蛋(dàn)白有種(zhǒng)的特異性,如免疫(yì)抗雞血清(qīng)球蛋白隻對雞的(dí)球蛋(dàn)白(bái)發生(shēng)反應(yīng),因(yīn)此(cǐ),製備標(biāo)記抗體適用於雞(jī)任(rèn)何(hé)抗原(yuán)的診斷。
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