一，Lipo 2000介(jiè)紹

是一種多功(gōng)能(néng)轉(zhuǎn)染(rǎn)試(shì)劑，經證(zhèng)明可以(yǐ)將各(gè)種(zhǒng)有效載荷(hé)有效地轉(zhuǎn)染(rǎn)到各(gè)種(zhǒng)貼壁(bì)和懸浮(fú)細(xì)胞(bāo)係中(zhōng)。

二，Lipo 2000轉染(rǎn)步(bù)驟

1.轉染前(qián)一天，胰(yí)酶消(xiāo)化(huà)細(xì)胞並(bìng)計數，細(xì)胞鋪板(bǎn)，使(shǐ)其(qí)在(zài)轉(zhuǎn)染日密(mì)度為90-95%。細(xì)胞鋪板在2 ml含血清，不含抗生(shēng)素(sù)的(dí)正常(cháng)生長的(dí)培養(yǎng)基(jī)中.2.對(duì)於每(měi)孔(kǒng)細(xì)胞，使用250 u無血(xiě)清培養(yǎng)基(jī)(如OPTI-MEMI培養基)稀釋4.0ugDNA，輕輕混(hùn)匀(yún)。

3.使用(yòng)前將(jiāng)Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑輕(qīng)輕混匀(yún)，用250 u無血(xiě)清(qīng)培(péi)養(yǎng)基(如(rú)OPTI-MEM|培養(yǎng)基(jī))稀(xī)釋10 ul Lipo2000轉染(rǎn)試(shì)劑(jì)，輕(qīng)輕混(hùn)匀。Lipo 2000稀釋(shì)後，在5分鐘內(nèi)同(tóng)稀釋的(dí)DNA混(hùn)合(hé)(<30分鐘)。NOTE:若使(shǐ)用DMEM培養基，則需(xū)在(zài)5分(fēn)鐘內(nèi)同稀釋的(dí)DNA混(hùn)合。

4.混(hùn)合稀釋(shì)的(dí)DNA(第二(èr)步)和(hé)稀釋(shì)的(dí)Lipo 2000(第三步)。室溫(wēn)放(fàng)置(zhì)20分(fēn)鐘。

5.(optional)將6孔板(bǎn)中的舊營養液吸出(chū)，用(yòng)無(wú)血(xiě)清(qīng)培養基(jī)清洗(xǐ)兩次。加(jiā)入2 ml無血清(qīng)配養(yǎng)基(jī)。

6.直接將復合物(wù)加入到每孔(kǒng)中(zhōng)，搖(yáo)動培養板(bǎn)，輕輕混(hùn)匀。

7.在(zài)37℃，5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉(diào)復(fù)合(hé)物或更換培(péi)養基。或者(zhě)在(zài)4-5小(xiǎo)時後(hòu)更換培(péi)養生長(cháng)基也(yě)不(bù)會降(jiàng)低轉染活(huó)性，

8.在細胞(bāo)中加入(rù)復合(hé)物24-72小(xiǎo)時後，分(fēn)析細胞(bāo)抽提物(wù)或(huò)進行原位(wèi)細(xì)胞(bāo)染(rǎn)色，檢(jiǎn)測報告基因活性。這依賴(lài)於細(xì)胞類(lèi)型和啟動(dòng)子活(huó)性。對(duì)穩定(dìng)表達(dá)，在開(kāi)始轉染(rǎn)一(yī)天後將細(xì)胞傳(chuán)代至新鮮(xiān)培(péi)養基中，兩天(tiān)後(hòu)加(jiā)入篩(shāi)選(xuǎn)抗(kàng)生素。進(jìn)行穩定表(biǎo)達需要(yào)數天或(huò)數周(zhōu)。貼(tiē)壁(bì)細(xì)胞的(dí)穩定(dìng)轉染:

轉(zhuǎn)染(rǎn)後(hòu)24小時(shí)，將(jiāng)細胞以(yǐ)z1:10的比例傳(chuán)代至新鮮(xiān)培養(yǎng)基中(zhōng)，次日(rì)加(jiā)入(rù)選(xuǎn)擇(zé)性培(péi)養基。

三，Lipo2000購買渠道

賽默(mò)飛代(dài)理——天津益(yì)元利(lì)康(kāng)生(shēng)物科(kē)技有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司，公司產(chǎn)品綫涉(shè)及(jí)細(xì)胞與基(jī)因(yīn)治(zhì)療，免疫學(xué)，分子生(shēng)物學，細(xì)胞生物(wù)學等(děng)多個方向(xiàng)，專(zhuān)注於(yú)生(shēng)命科學試(shì)劑，耗(hào)材，細胞(bāo)，儀(yí)器等(děng)產品銷(xiāo)售。