細(xì)胞分(fēn)選(xuǎn)試(shì)劑(jì)盒的核(hé)心目(mù)標是從混合細(xì)胞群體中(zhōng)高(gāo)效(xiào),特異(yì)地(dì)分(fēn)離目標(biāo)細(xì)胞(bāo),其(qí)主流(liú)技(jì)術主(zhǔ)要基於磁珠(zhū)分(fēn)選法(fǎ)(如MACS技術)或(huò)熒(yíng)光(guāng)激(jī)活(huó)細胞(bāo)分選法(fǎ)(FACS)。今天(tiān)詳細介(jiè)紹一下MACS:
一(yī),MACS核(hé)心原理(lǐ)
利(lì)用抗體(tǐ)-磁珠(zhū)復(fù)合物(wù)特(tè)異性結合目標(biāo)細胞表(biǎo)麵標誌(zhì)物,通(tōng)過磁場吸附實(shí)現分(fēn)離。
二,MACS分選流(liú)程
1.標記(jì)磁(cí)珠:
試(shì)劑盒提供(gōng)預先偶聯特(tè)異性抗體(tǐ)(如(rú)抗CD4,CD19)的磁(cí)性微珠(zhū)。
將磁珠(zhū)與(yǔ)細(xì)胞(bāo)懸液(yè)混(hùn)合,磁珠通過(guò)抗體(tǐ)與(yǔ)目標細(xì)胞表麵抗原結合。
2.磁場分(fēn)離:
將混(hùn)合液(yè)置於(yú)磁力架(jià)(如Miltenyi的MACSiMAG分(fēn)離(lí)器)中,磁(cí)場吸附磁(cí)珠標記(jì)的細(xì)胞。
未(wèi)標記(jì)的(dí)細胞(非目(mù)標細(xì)胞(bāo))保留(liú)在溶(róng)液(yè)中,通(tōng)過傾(qīng)倒(dǎo)或吸棄去(qù)除(chú)。
3. 收(shōu)集(jí)目(mù)標(biāo)細胞:
移(yí)除磁場後,用緩衝液洗脫(tuō)磁(cí)珠標(biāo)記(jì)的(dí)細胞,獲(huò)得高純(chún)度目標(biāo)群體(tǐ)。
三,MACS分選(xuǎn)模式
正選(xuǎn)(Positive Selection):直接標記並(bìng)分離目標細(xì)胞(bāo)(如CD4+ T細胞(bāo))。
負(fù)選(xuǎn)(Negative Selection):標(biāo)記(jì)並(bìng)去除非目標(biāo)細胞(bāo),剩(shèng)餘未(wèi)標記的(dí)即為目(mù)標(biāo)細(xì)胞(bāo)(如(rú)未(wèi)成熟(shú)的(dí)造血幹(gān)細(xì)胞)。
四,MACS優勢
無(wú)需(xū)復雜(zá)儀器(qì),操(cāo)作簡(jiǎn)單快速(約30分鐘)。
細胞(bāo)活性(xìng)高(>90%),適(shì)合後續功能實驗(yàn)(如(rú)培養(yǎng),移植)。
五,應用(yòng)場景(jǐng)
免疫(yì)學(xué)研究(jiū):分(fēn)離T細(xì)胞,B細(xì)胞,NK細胞等亞群。
腫瘤治療:分(fēn)選CAR-T細(xì)胞(bāo)或(huò)腫瘤(liú)浸(jìn)潤(rùn)淋(lín)巴(bā)細胞(bāo)(TILs)。
幹細胞(bāo)研究(jiū):富(fù)集(jí)造血(xiě)幹細(xì)胞(bāo)或(huò)間充質幹細胞(bāo)。
六,注意事項(xiàng)
抗體(tǐ)選擇:需驗(yàn)證(zhèng)抗體與(yǔ)目標(biāo)物種及細胞類型(xíng)的(dí)兼(jiān)容性(xìng)。
細胞活性(xìng):避免長時(shí)間孵(fū)育或(huò)劇(jù)烈離心損傷(shāng)細胞。
交(jiāo)叉(chā)汙染:分(fēn)選(xuǎn)前過濾細(xì)胞懸液(如(rú)40 μm濾網)去除團塊。
七,總結
細胞(bāo)分選試劑盒通(tōng)過(guò)特異(yì)性標記與(yǔ)物(wù)理分離(lí)技(jì)術(磁(cí)場(cháng)或(huò)熒光信號(hào))的(dí)結(jié)合(hé),實(shí)現了對目標細胞(bāo)的(dí)高效純化。磁珠法(fǎ)適合快(kuài)速,低(dī)成(chéng)本的分選需求,而FACS法則在(zài)復雜(zá)多標(biāo)誌物分(fēn)選(xuǎn)中(zhōng)更具優(yōu)勢(shì),兩者共同推動(dòng)了基礎研究與臨(lín)床應用的(dí)進展(zhǎn)。
