jetPRIME® 轉染試劑(jì) 說明(míng)書(shū)要點(diǎn)

一(yī)，用(yòng)途
用於(yú)將DNA（質粒，siRNA，miRNA等）高(gāo)效(xiào)轉(zhuǎn)染(rǎn)至貼壁或懸浮培養的(dí)哺乳動(dòng)物細胞中
。

二，操作(zuò)流程（簡(jiǎn)化版(bǎn)）

詳細(xì)版見《》
A. 試劑準備

使用前(qián)將jetPRIME® 室(shì)溫平衡(héng)15分(fēn)鐘，輕柔(róu)混(hùn)匀(yún)
。

用無菌緩衝液(yè)（如150mM NaCl）稀釋(shì)DNA
。

B. 混合

按(àn)比例混(hùn)合(hé)稀釋的DNA與(yǔ)jetPRIME®（例(lì)如：1µg DNA : 2µL 試劑）
。

渦(wō)旋振(zhèn)蕩(dàng)10秒(miǎo)，室溫(wēn)靜置10分鐘(zhōng)形(xíng)成轉染復(fù)合(hé)物(wù)
。

C. 轉染

將復合物(wù)逐滴加入(rù)細胞培(péi)養基(jī)中，輕(qīng)柔(róu)搖(yáo)晃(huǎng)培養皿(mǐn)混匀(yún)
。

37°C孵育4-24小(xiǎo)時後更換(huàn)新(xīn)鮮培(péi)養(yǎng)基（視細(xì)胞類(lèi)型(xíng)而定）
。

三(sān)，推薦比例(lì)（參考）

四(sì)，注意事項(xiàng)

細(xì)胞(bāo)密度：轉染時細(xì)胞應(yīng)達(dá)60-80%匯合度(dù)
。

血清(qīng)兼容(róng)性：可(kě)直接(jiē)加入(rù)含血清的(dí)培養基(jī)中
。

保存條件：4°C儲存（勿(wù)冷(lěng)凍），避免光照
。

安(ān)全性(xìng)：操作(zuò)時戴(dài)手套，在生物(wù)安(ān)全(quán)櫃中進行(háng)
。

五(wǔ)，提高(gāo)敏(mǐn)感細(xì)胞(bāo)細(xì)胞活力的(dí)提示

（1）轉染後4小(xiǎo)時更換(huàn)培養(yǎng)基(jī)
。

（2）將DNA量減(jiǎn)少(shǎo)到0.5倍(bèi)，同時(shí)保(bǎo)持(chí)之前使(shǐ)用的(dí)DNA/jetOPTIMUS®比(bǐ)例(lì)
。

（3）在(zài)較(jiào)早的時(shí)間點（例如(rú)轉染後24小(xiǎo)時(shí)而(ér)不(bù)是(shì)48小時）分(fēn)析轉染(rǎn)
。

（4）在敏(mǐn)感細胞(bāo)的還(huán)原血清培(péi)養基中進行轉(zhuǎn)染
。

（5）檢查靶基(jī)因是否影響(xiǎng)細胞(bāo)活力(lì)
。

（6）確(què)保細胞在轉染(rǎn)前(qián)已(yǐ)傳代兩次(cì)以上(shàng)且(qiě)少於20次(cì)
。

（7）丟棄過(guò)度培養的細胞(bāo)
。

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