Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑標(biāo)準操(cāo)作步驟(zhòu)

更新時間(jiān)：2025-07-01

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以下是(shì) Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試(shì)劑的標準操(cāo)作步(bù)驟（適用(yòng)於貼壁(bì)細(xì)胞），操(cāo)作前請確(què)認(rèn)細胞狀(zhuàng)態(tài)，核酸純度及(jí)實(shí)驗條件適配性(xìng)。

一，試劑(jì)準備(bèi)

試(shì)劑名稱	要求(qiú)
jetPRIME®	使用(yòng)前(qián)平(píng)衡(héng)至室溫，輕渦(wō)旋混(hùn)匀(yún)（勿(wù)劇烈(liè)震蕩）
核酸（DNA/siRNA）	高(gāo)純度(dù)（OD<sub>260/280</sub>≈1.8-2.0），無(wú)菌無(wú)內毒素(sù)，溶(róng)於無菌水或(huò)TE緩衝(chōng)液
jetPRIME® Buffer	提供(gōng)無菌(jūn)緩(huǎn)衝液(yè)（若試劑(jì)盒(hé)內含）
細(xì)胞培養基	含血清 & 抗生(shēng)素（轉(zhuǎn)染(rǎn)全程無(wú)需更換無血清培(péi)養基）

二(èr)， Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑(jì)操作(zuò)流(liú)程（24孔(kǒng)板為例(lì)）

Day 0: 細胞鋪板

1. 細(xì)胞計數(shù)：消(xiāo)化對數生長期細(xì)胞(bāo)，調(tiáo)整密(mì)度。

2. 鋪(pū)板(bǎn)：

- 每孔(kǒng)加(jiā)入 0.5~1×10⁵ cells（貼壁(bì)細(xì)胞）

- 用 500μL wan-quan培養基（含(hán)10%血清(qīng)+抗生素(sù)）培(péi)養(yǎng)。

- 關鍵(jiàn)：轉(zhuǎn)染(rǎn)時(shí)細胞密(mì)度(dù)需達 70~90% 匯(huì)合度(dù)（過(guò)度生(shēng)長(cháng)降(jiàng)低(dī)效率）。

Day 1: 轉(zhuǎn)染（耗時(shí)<15分(fēn)鐘(zhōng)）

> �� 所有(yǒu)步驟(zhòu)在無菌(jūn)環境(jìng)（超淨(jìng)台）操作，試(shì)劑(jì)室溫(wēn)平衡。

步驟(zhòu)	操(cāo)作(zuò)
1. 稀(xī)釋(shì)核(hé)酸	取 1μg DNA（或(huò) 1.5~5nM siRNA）加入(rù) 200μL jetPRIME Buffer 中(zhōng)，輕混匀(yún)（如無Buffer可(kě)用(yòng)無菌(jūn)Opti-MEM替(tì)代）。
2. 加轉(zhuǎn)染(rǎn)試劑	向(xiàng)稀(xī)釋核酸(suān)中加入 2μL jetPRIME®（DNA:jetPRIME = 1μg:2μL）。
3. 混(hùn)合孵育	立即(jí)渦旋(xuán)10秒 → 室(shì)溫靜置(zhì)10分(fēn)鐘（溶液變渾濁屬(shǔ)正常(cháng)現象）。
4. 加(jiā)入細胞(bāo)	將混合(hé)液逐(zhú)滴加入細胞孔(kǒng)，輕搖培養板混(hùn)匀。
5. 繼(jì)續(xù)培養(yǎng)	放回(huí)37℃ CO<sub>2</sub>培養(yǎng)箱(xiāng)，無需(xū)更(gēng)換培養基。

三，關(guān)鍵優(yōu)化參數

變(biàn)量	推薦(jiàn)條件	調整建議(yì)
細胞(bāo)密度	70~90% 匯合度(dù)	過密(mì)→降(jiàng)低(dī)效率；過(guò)低(dī)→細胞(bāo)毒性↑
DNA:jetPRIME比(bǐ)例(lì)	1μg DNA : 2μL 試(shì)劑（24孔板(bǎn)標準）	按比(bǐ)例放(fàng)大/縮小（如6孔(kǒng)板用4μg DNA+8μL試劑(jì)）
siRNA用量	終濃度(dù) 10~50nM（參考(kǎo)細胞(bāo)類(lèi)型）	敏感(gǎn)細(xì)胞從(cóng)低濃度（10nM）起始(shǐ)測(cè)試(shì)
孵(fū)育(yù)時間(jiān)	轉染後(hòu) 24~72小時(shí) 檢測表(biǎo)達（峰值(zhí)通(tōng)常(cháng)48h）	熒光蛋(dàn)白(bái)觀察(chá)24h，功能實(shí)驗(yàn)需(xū)48~72h

四(sì)，懸浮細胞(bāo)轉染步(bù)驟

若轉染懸(xuán)浮細胞(bāo)（如(rú)Jurkat，THP-1）：

1. 離(lí)心(xīn)收(shōu)集細胞 → 重(zhòng)懸於(yú) 新(xīn)鮮培(péi)養(yǎng)基（密(mì)度 0.5~1×10⁶ cells/mL）。

2. 按 1mL細胞(bāo)懸(xuán)液 + 混(hùn)合液（1μg DNA + 2μL jetPRIME）加入EP管。

3. 輕柔混匀(yún) → 37℃靜(jìng)置(zhì) 15~30分鐘 → 轉移至培養板繼續(xù)培(péi)養。

五(wǔ)， Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑(jì)使用(yòng)注意事(shì)項

1. 細胞狀(zhuàng)態(tài)：僅用健(jiàn)康，低傳代細胞(bāo)（傳代<30）。

2. 試劑保存：jetPRIME® 4℃避光保存（非-20℃），保質期(qī)內(nèi)穩(wěn)定。

3. 避免汙(wū)染：核(hé)酸(suān)和Buffer嚴(yán)格無菌(jūn)操(cāo)作(zuò)。

4. 毒(dú)性處(chǔ)理：若(ruò)細(xì)胞死(sǐ)亡(wáng)率高：

- ↓ 降低jetPRIME用量（如1μg DNA用1.5μL試(shì)劑）

- ↓ 縮(suō)短(duǎn)轉(zhuǎn)染(rǎn)後(hòu)培(péi)養(yǎng)時(shí)間（24h後(hòu)換(huàn)液）。

5. 對(duì)照(zhào)設置：必設(shè) 空(kōng)載(zǎi)體(tǐ)對照(zhào)組(zǔ) + 未(wèi)轉(zhuǎn)染組。

六(liù)，Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑(jì)替代方案（特殊(shū)情(qíng)況）

場(cháng)景	替代(dài)方(fāng)案(àn)
高難度(dù)細胞（原代，神(shén)經元）	改用(yòng) jetOPTIMUS®
體內(nèi)轉染	搭(dā)配 in vivo-jetPEI®
大(dà)片段(duàn)DNA（>15kb）	測試(shì) jetPEI®

問(wèn)題(tí)排(pái)查(chá)：若效率低 → 檢查核酸純度(dù)，細胞密度(dù)，試劑比(bǐ)例(lì)；或聯(lián)係 ——天(tiān)津益元利康(kāng)生物(wù)科技有(yǒu)限公司獲取(qǔ)技(jì)術支持(chí)。