CHO細胞(bāo)（中國倉鼠卵巢細(xì)胞(bāo)）是(shì)生物製藥(yào)和(hé)基(jī)礎(chǔ)研究(jiū)中(zhōng)zui常用(yòng)的(dí)哺(bǔ)乳動(dòng)物(wù)表(biǎo)達宿主(zhǔ)之一
，用於(yú)生(shēng)產重組(zǔ)蛋(dàn)白(bái)（如治療(liáo)性抗體(tǐ)，酶，激素等）。轉染是將(jiāng)外源核(hé)酸(suān)（通常(cháng)是質粒(lì)DNA）導入CHO細胞(bāo)內的關鍵(jiàn)步(bù)驟。

以(yǐ)下是(shì)CHO細(xì)胞(bāo)轉(zhuǎn)染的(dí)常(cháng)見(jiàn)方法，步(bù)驟和注意事(shì)項：

一(yī)， CHO細胞主要(yào)轉(zhuǎn)染方法

�化(huà)學(xué)轉染：使用轉染試劑（如(rú)聚合物試(shì)劑，脂質(zhì)體等）幫助(zhù)DNA或RNA進入細胞(bāo)。這(zhè)種方(fāng)法(fǎ)的(dí)優(yōu)點是操作(zuò)簡(jiǎn)便
，適用於常(cháng)規(guī)實(shí)驗。

�電轉：通過電場使細胞膜(mó)暫時開放
，以(yǐ)便(biàn)DNA/RNA進入細(xì)胞。這種(zhǒng)方法(fǎ)適用於準備(bèi)DNA轉(zhuǎn)染(rǎn)或大量細胞(bāo)轉染時。

�病毒(dú)介導(dǎo)轉(zhuǎn)染(rǎn)：使用(yòng)病(bìng)毒載(zǎi)體（如(rú)腺病毒或慢(màn)病(bìng)毒）將目(mù)標基因導入(rù)細胞
，轉染效率高
，但製作過程復(fù)雜(zá)。

二，CHO細(xì)胞轉染步(bù)驟

以(yǐ)使(shǐ)用中科(kē)百抗PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit為(wéi)例。

適(shì)用於(yú)各種CHO細(xì)胞係
，包括(kuò)CHO-S，CHO-K1等。shouxuan ExpiCHO-S。PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit配合PolyToolTM CHO Medium，PolyToolTM Enhance S1，PolyToolTM Enhance S2，PolyToolTM Expression Enhancer使用可大幅度提高重組蛋白的表(biǎo)達產(chǎn)量。

▶️材料準(zhǔn)備(bèi)：
試(shì)劑：PolyToolTM CHO Transfection Reagent，Transfection Reagent Diluent，PolyToolTM CHO Medium，PolyToolTM Enhance S1，PolyToolTM Enhance S2，PolyToolTM Expression Enhancer；
宿(sù)主細胞(bāo)（例(lì)：ExpiCHO-S
，瞬(shùn)轉前1~2天接種
，瞬轉(zhuǎn)當天密度~6×106cells/mL
，倍(bèi)增時(shí)間~18 h；

表(biǎo)達質粒（例(lì)：CMV啟動(dòng)子驅動的Trastuzumab表達(dá)質(zhì)粒
，濃度1 μg/μL；

培(péi)養(yǎng)容(róng)器(qì)（例：125 mL搖瓶(píng)）。
▶️轉(zhuǎn)染（以25mL瞬(shùn)轉體係為例
，標準方案(àn)）
1.換液：300g離心5 min
，收(shōu)集(jí)ExpiCHO-S細胞
，換液(yè)至(zhì)37°C預(yù)熱好的PolyToolTM CHO Medium中(zhōng)
，同時調整(zhěng)細胞密度到(dào)6×106cells/mL。細胞搖床(chuáng)設(shè)定為(wéi)37°C
，8.0% CO2
，120 rpm
，80% RH（相(xiāng)對(duì)濕度(dù)）。
2.復(fù)合：

①取1.25 mL PolyToolTM CHO Medium（占(zhān)最(zuì)終表達(dá)體(tǐ)積的(dí)5%）稀(xī)釋(shì)25μg質粒DNA（單質粒係統(tǒng)質量為(wéi)25μg
，雙(shuāng)質粒(lì)係統(tǒng)總質量為(wéi)25μg）
，輕柔(róu)混匀；

②另取1.25mL PolyToolTM CHO Medium
，加(jiā)入375μL室溫融(róng)解的Transfection Reagent Diluent和62.5μL PolyToolTM CHO Transfection Reagent（確(què)保總DNA與(yǔ)轉(zhuǎn)染(rǎn)試(shì)劑的質(zhì)量(liáng)比(bǐ)為1:2.5）
，輕柔混(hùn)匀；

③將轉(zhuǎn)染試劑稀(xī)釋(shì)液(yè)緩(huǎn)慢加(jiā)入質粒稀釋液中
，立(lì)即輕柔混匀
，室溫孵育(yù)10 min使轉染復合物(wù)充分形(xíng)成（復(fù)合(hé)的(dí)時候由(yóu)於特(tè)異(yì)的組裝結(jié)構可(kě)能(néng)會出現渾濁現象
，不(bù)影(yǐng)響使用(yòng)效(xiào)果
，請放(fàng)心使用）。
3.轉染：從搖床(chuáng)中(zhōng)取出(chū)第1步換(huàn)液培(péi)養(yǎng)的ExpiCHO-S
，加(jiā)入孵育好(hǎo)的(dí)DNA/PolyToolTMCHO Transfection Reagent復合(hé)物(wù)
，完(wán)成轉染。放回搖床繼(jì)續培(péi)養(yǎng)。
4.轉染(rǎn)後(hòu)18-22h(Day1)：補料2mL Enhance S1（占最終(zhōng)表(biǎo)達體(tǐ)積(jī)的8%），75μL Enhance S2（占最(zuì)終表達(dá)體積的(dí)0.3%）和(hé)250μL Expression enhancer（占(zhān)最(zuì)終(zhōng)表達體(tǐ)積(jī)的1%）
，取樣計(jì)數(shù)，測生(shēng)化(huà)。
5.之(zhī)後(hòu)每隔(gé)三天（若(ruò)表達(dá)7天則在(zài)Day4）：補料(liào)2mL Enhancer S1（占最(zuì)終表達體積的8%）
，取樣(yàng)計數，測生化。
6.轉(zhuǎn)染後(hòu)Day7：取樣計數，測(cè)生化(huà)
，收獲上(shàng)清。

 更多(duō)請聯(lián)係天(tiān)津益(yì)元(yuán)利康(kāng)生(shēng)物(wù)科(kē)技有(yǒu)限公(gōng)司(sī)。