外(wài)泌體(tǐ)提取試(shì)劑盒的原(yuán)理(lǐ)多種多(duō)樣(yàng)，但其(qí)核(hé)心都是(shì)基於(yú)外泌體(tǐ)的物理(lǐ)特性(xìng)或生(shēng)化(huà)特性(xìng)，將(jiāng)其(qí)從復(fù)雜的生物(wù)樣品（如(rú)細胞(bāo)上清，血(xiě)清(qīng)，血漿(jiāng)）中分離(lí)出來(lái)。

目前主流(liú)的(dí)外泌(mì)體(tǐ)提(tí)取試劑盒主(zhǔ)要(yào)基於(yú)以(yǐ)下(xià)幾(jī)大(dà)原理：

外(wài)泌體的(dí)形(xíng)成和攜帶物質

一(yī)，外泌體提取試劑盒原(yuán)理一：超(chāo)速離心(xīn)法 (Ultracentrifugation, UC) - “金(jīn)標(biāo)準(zhǔn)"

雖然傳(chuán)統上(shàng)不算是(shì)“試(shì)劑盒(hé)"，但(dàn)它(tā)是(shì)所有方(fāng)法(fǎ)的比對基準。現在也有(yǒu)配(pèi)套(tào)的(dí)密度(dù)梯(tī)度試(shì)劑(jì)。

原(yuán)理(lǐ)：利用外泌(mì)體的大小，密度(dù)和(hé)沉降(jiàng)係數(shù)與樣品中其他成分（如(rú)蛋白質，細胞(bāo)碎(suì)片(piàn)，大囊泡(pào)）的(dí)差異，在(zài)超高(gāo)速離(lí)心力（通(tōng)常≥100,000 × g）下，外泌(mì)體會被沉澱(diàn)到(dào)管(guǎn)底(dǐ)。

特(tè)點：

優點：被認為是(shì)提取(qǔ)外(wài)泌(mì)體(tǐ)的(dí)“黃金標準"；無需特殊(shū)化學試劑(jì)，可(kě)獲取(qǔ)較純淨的(dí)外(wài)泌體(tǐ)。

缺(quē)點：設(shè)備(bèi)極其昂(áng)貴；流(liú)程耗(hào)時(shí)漫長（數小(xiǎo)時至數(shù)天）；需(xū)要大(dà)量起始樣本；高速(sù)離心力可能(néng)損傷外泌體(tǐ)結構，導致聚(jù)集(jí)。

二(èr)，外泌體提取試劑盒(hé)原(yuán)理(lǐ)二(èr)：聚合(hé)物的沉(chén)澱法 (Polymer-based Precipitation)

這是(shì)目前zui常(cháng)用(yòng)的(dí)試劑盒原理。例如 Qiagen exoEasy, System Biosciences (SBI) ExoQuick, 和 Wako 的(dí)普(pǔ)通提(tí)取(qǔ)試劑(jì)。

原(yuán)理(lǐ)：

向(xiàng)樣品(pǐn)中(zhōng)加入親水性聚合(hé)物（如PEG）。

這些聚合物(wù)會與溶(róng)液中的(dí)水分(fēn)子(zǐ)結(jié)合，“劫持"水化層(céng)，破(pò)壞外(wài)泌體的溶(róng)解性。

同(tóng)時，它們(mén)能(néng)形(xíng)成一(yī)個“網"來捕獲外(wài)泌體(tǐ)。

在低速離心力下，外泌(mì)體-聚(jù)合(hé)物(wù)復(fù)合(hé)物(wù)就(jiù)會從溶(róng)液中(zhōng)共同沉澱下(xià)來。

特(tè)點：

優(yōu)點：操作(zuò)簡單快速；無(wú)需(xū)昂貴(guì)設備；起始(shǐ)樣(yàng)本(běn)量要求低；回(huí)收效率(shuài)高。

缺(quē)點：純度較低，會共沉(chén)澱蛋(dàn)白質(zhì)聚(jù)合物，脂蛋(dàn)白(bái)等(děng)雜質；沉澱(diàn)可(kě)能難以(yǐ)重懸；聚(jù)合(hé)物(wù)可能幹擾下遊分(fēn)析(xī)。

三(sān)，外(wài)泌體提取(qǔ)試劑盒原理三(sān)：尺寸排阻(zǔ)色(sè)譜法 (Size-exclusion Chromatography, SEC)

能獲得高純(chún)度，高(gāo)完(wán)整性(xìng)外泌(mì)體的方(fāng)法。例(lì)如 qEV係(xì)列/Izon Science 產品(pǐn)。

原理(lǐ)：

樣品被(bèi)加(jiā)載到(dào)一(yī)個充滿(mǎn)多孔(kǒng)聚(jù)合(hé)物(wù)微(wēi)球的(dí)色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)上(shàng)

不同大小的分子(zǐ)在通過柱(zhù)子(zǐ)時，路徑長短(duǎn)不(bù)同(tóng)。

大分子(zǐ)（如(rú)外泌(mì)體）無法進入微球(qiú)的小孔，會沿著微(wēi)球之間的縫隙(xì)快速流(liú)動，最(zuì)先被洗脫(tuō)出(chū)來。

小(xiǎo)分子（如(rú)蛋(dàn)白質，小RNA）會進(jìn)入微(wēi)球的(dí)大量孔(kǒng)隙中，路徑(jìng)更長(cháng)，較(jiào)晚被洗(xǐ)脫出(chū)來(lái)。

通過(guò)分(fēn)步收(shōu)集，即(jí)可(kě)獲得(dé)純(chún)度很高(gāo)的外(wài)泌體組(zǔ)分。

特點(diǎn)：

優(yōu)點：能獲(huò)得完(wán)整性好，生物活性高的外(wài)泌體；純度(dù)遠(yuǎn)高(gāo)於(yú)沉(chén)澱(diàn)法(fǎ)；避免了聚(jù)集(jí)效應。

缺點(diǎn)：樣本(běn)可(kě)能被(bèi)稀釋(shì)；上(shàng)樣量有限(xiàn)；對(duì)於粘性樣本(běn)（如血漿）易(yì)堵(dǔ)塞(sāi)柱子。

四，外泌(mì)體(tǐ)提取(qǔ)試(shì)劑(jì)盒原(yuán)理四：免疫親(qīn)和捕(bǔ)獲法 (Immunoaffinity Capture)

純度最(zuì)高(gāo)，特(tè)異性zui強(qiáng)的方法。例如(rú) Wako的(dí) MagCapture™，CD9/CD63/CD81抗體(tǐ)磁珠(zhū)試(shì)劑盒。

原理(lǐ)：

利(lì)用外泌體表(biǎo)麵特(tè)異(yì)性標誌(zhì)物（如(rú) CD9, CD63, CD81, EpCAM 等(děng)）。

將(jiāng)針對這些標(biāo)誌物的抗體固定(dìng)在(zài)固相(xiāng)支持(chí)物上（如磁珠(zhū)，平(píng)板，色譜(pǔ)柱）。

當樣(yàng)品(pǐn)流過時(shí)，表麵(miàn)帶(dài)有(yǒu)相(xiāng)應標(biāo)誌(zhì)物的外泌(mì)體會被抗體特(tè)異性捕(bǔ)獲(huò)，而雜(zá)質則被洗去(qù)。

通(tōng)過改變pH值(zhí)或使(shǐ)用(yòng)競爭性肽(tài)段(duàn)進(jìn)行(háng)洗脫，即(jí)可得到高(gāo)純(chún)度的(dí)特定外泌體(tǐ)亞(yà)群(qún)。

特點(diǎn)：

優點：純度(dù)ji高；可用於分(fēn)離特定細胞來(lái)源的外(wài)泌(mì)體亞群(qún)。

缺點：成本(běn)昂貴(guì)；洗脫條(tiáo)件可(kě)能(néng)較劇烈(liè)，損傷外泌(mì)體(tǐ)活(huó)性(xìng)；隻能捕(bǔ)獲(huò)表達特(tè)定(dìng)標誌物的外泌(mì)體，會(huì)丟(diū)失其(qí)他亞群。

五，外(wài)泌(mì)體(tǐ)提(tí)取試劑盒原理五(wǔ)：微流(liú)控(kòng)技術(shù) (Microfluidics)

新興(xīng)的(dí)前沿技(jì)術，主(zhǔ)要用於(yú)集成(chéng)化，自動化(huà)的(dí)快(kuài)速檢測。

原理：在(zài)芯片上構(gòu)建(jiàn)微(wēi)米(mǐ)級(jí)的(dí)通(tōng)道(dào)，通過聲(shēng)學(xué)，力學或(huò)免(miǎn)疫(yì)親和原理，在流(liú)體(tǐ)中實時(shí)捕(bǔ)獲和(hé)分(fēn)離(lí)外泌體(tǐ)。

特(tè)點：

優點(diǎn)：所(suǒ)需樣(yàng)本量極(jí)少(shǎo)；速度(dù)快；有望實現(xiàn)高度集(jí)成化和自動化。

缺(quē)點：技(jì)術尚(shàng)未wanquan成熟和(hé)普及；通量(liáng)較低；設(shè)備成本高(gāo)。

總結(jié)與選(xuǎn)擇指(zhǐ)南(nán)

如何選(xuǎn)擇？

追求速(sù)度和簡(jiǎn)便(biàn) → 沉澱法(fǎ)試(shì)劑盒

追(zhuī)求純度和(hé)生(shēng)物(wù)活性 → 尺寸排(pái)阻色譜(pǔ)試劑(jì)盒

追(zhuī)求超(chāo)高純度(dù)或特(tè)定亞型(xíng) → 免疫親和(hé)捕獲試(shì)劑(jì)盒

有超(chāo)離(lí)設(shè)備且(qiě)不趕(gǎn)時間(jiān) → 超速(sù)離(lí)心(xīn)法(fǎ)

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