一，超濾離心管(guǎn)注意事(shì)項與技(jì)巧

1. MWCO選(xuǎn)擇(zé)：選(xuǎn)擇MWCO應(yīng)為目標分(fēn)子大小的 1/3 到(dào) 1/2。例如，濃縮100 kDa的蛋白，最(zuì)好選擇30-50 kDa的MWCO。

2. 離心力是(shì)關(guān)鍵(jiàn)：嚴禁(jīn)超過說明書標注(zhù)的最(zuì)大離心力！過(guò)高的離(lí)心力會壓縮(suō)膜(mó)結構(gòu)，導(dǎo)致不(bù)可(kě)逆的(dí)損壞和(hé)通(tōng)量(liáng)下降。

3. 避免膜幹燥：在任何(hé)時候（包(bāo)括預(yù)處理後等(děng)待加(jiā)樣的短(duǎn)暫時間）都不(bù)要讓膜(mó)變(biàn)幹，幹(gān)燥會(huì)yongjiu性損(sǔn)壞膜。

4. 處(chǔ)理(lǐ)復雜樣品(pǐn)：對(duì)於(yú)高(gāo)粘度(dù)（如細胞(bāo)裂解(jiě)液），高鹽或含(hán)有(yǒu)脂質的樣品，容(róng)易(yì)發(fā)生(shēng)膜(mó)堵塞。可通過(guò)預(yù)先稀(xī)釋(shì)樣品，間歇式離心(xīn)（離心(xīn)5分鐘，混匀再(zài)離心）或選擇(zé)低(dī)吸(xī)附材(cái)質的(dí)膜(mó)（如(rú)PES膜比纖維(wéi)素(sù)膜更(gēng)耐(nài)汙(wū)染(rǎn)）來(lái)改善(shàn)。

5. 減少(shǎo)非(fēi)特異性吸(xī)附：對於低濃(nóng)度或(huò)珍(zhēn)貴(guì)的(dí)蛋白(bái)樣品，可用(yòng)含0.1% BSA或Tween-20的緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)預處理(lǐ)膜，以封閉(bì)膜的吸(xī)附(fù)位(wèi)點(diǎn)，預處理後(hòu)需用目的緩(huǎn)衝(chōng)液再潤洗一次(cì)。

6. 檢(jiǎn)查(chá)膜(mó)完整性：如(rú)果懷(huái)疑(yí)膜已破損，可加(jiā)入一種(zhǒng)已知分子(zǐ)量的染料（如(rú)藍(lán)葡聚(jù)糖2000）離心，觀(guān)察(chá)濾液中(zhōng)是(shì)否(fǒu)有(yǒu)染(rǎn)料漏出(chū)。

二，超(chāo)濾(lǜ)離心(xīn)管常見問題解(jiě)答(dá) (FAQ)

Q1: 離心速度(dù)很慢(màn)，甚至(zhì)沒(méi)有濾液(yè)產生？

原(yuán)因：膜(mó)發生(shēng)堵(dǔ)塞。

解決(jué)方案：對樣品進行預處(chǔ)理（過濾(lǜ)或(huò)離(lí)心）；稀釋(shì)樣品(pǐn)；嘗試(shì)“間(jiān)歇離(lí)心"模式(shì)；檢查(chá)離心(xīn)力是否設(shè)置正確。

Q2: 目標蛋(dàn)白(bái)回收(shōu)率低(dī)？

原(yuán)因：非(fēi)特(tè)異性(xìng)吸附在膜(mó)或(huò)管壁上；膜被(bèi)刺破；蛋白(bái)沉澱(diàn)。

解決(jué)方案：使用低吸(xī)附材(cái)質的(dí)超濾(lǜ)管；用(yòng)BSA或Tween進行預(yù)處理；回收時(shí)充分(fēn)吹(chuī)打；確保(bǎo)操作過程中膜(mó)未被損壞；優化緩(huǎn)衝(chōng)條件(jiàn)（如添(tiān)加溫和(hé)還原劑(jì)）。

Q3: 濾液(yè)中有我的目標(biāo)蛋(dàn)白(bái)（泄露(lòu)）？

原因：選擇(zé)了MWCO過大(dà)的超濾管；膜破(pò)損。

解(jiě)決方(fāng)案：更換更(gēng)小MWCO的(dí)超(chāo)濾管；進行膜完(wán)整(zhěng)性測試。

Q4: 濃縮(suō)後樣(yàng)品(pǐn)體積(jī)遠大於預(yù)期？

原因(yīn)：樣品具有高粘(nián)度，膜(mó)上截留的液體無法被(bèi)wanquan離心下(xià)去(qù)。

解(jiě)決(jué)方(fāng)案(àn)：適當延長離(lí)心(xīn)時間或(huò)稍微(wēi)提(tí)高離心力(lì)（在(zài)允(yǔn)許範圍內(nèi)）；回(huí)收(shōu)時采用(yòng)倒扣離心法。

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