在(zài)細(xì)胞生(shēng)物(wù)學(xué)，藥(yào)物開(kāi)發，腫瘤研究等領(lǐng)域，快(kuài)速，準(zhǔn)確(què)地評估細(xì)胞(bāo)增(zēng)殖與毒(dú)性是至關重(zhòng)要(yào)的(dí)實(shí)驗環節(jié)
。其(qí)中，CCK-8試劑(jì)盒(hé)因(yīn)其操作簡(jiǎn)便，靈敏度(dù)高，安全性(xìng)好等優勢，已(yǐ)成為(wéi)國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室(shì)的(dí)標配(pèi)檢(jiǎn)測方法
。
 

　　一(yī)，CCK-8實驗原理：高效的(dí)酶促(cù)反應顯(xiǎn)色(sè)
 

　　CCK-8，全稱為Cell Counting Kit-8，其(qí)核心原(yuán)理是一種(zhǒng)基於顯(xiǎn)色反應的生物化學檢測方(fāng)法
。
 

　　在活(huó)細胞內部(bù)，始終存(cún)在一種(zhǒng)名為綫(xiàn)粒體脫氫酶(méi)的代(dài)謝酶(méi)
。該酶(méi)具有持續的活性
。CCK-8試(shì)劑(jì)中(zhōng)含有(yǒu)一種名(míng)為WST-8 的(dí)獨(dú)特水溶性四唑(zuò)鹽化(huà)合(hé)物
。
 

　　當(dāng)活(huó)細胞與(yǔ)CCK-8試劑(jì)共同孵育時(shí)，會(huì)發生(shēng)以下(xià)連(lián)鎖(suǒ)反應：
 

　　1. WST-8分子進入(rù)細胞
。
 

　　2. 在活(huó)細(xì)胞(bāo)綫(xiàn)粒(lì)體(tǐ)內(nèi)的脫氫酶(méi)催化下，WST-8被(bèi)還原，生成高度水(shuǐ)溶性(xìng)的橙(chéng)色(sè)甲瓚產(chǎn)物
。
 

　　3. 該(gāi)甲瓚染料(liào)會溶(róng)解(jiě)在細(xì)胞(bāo)培(péi)養液(yè)中，且(qiě)其生(shēng)成量與(yǔ)活(huó)細(xì)胞的(dí)數量(liáng)成(chéng)正比
。
 

　　因(yīn)此(cǐ)，通過使(shǐ)用(yòng)酶標(biāo)儀(yí)在(zài)450nm波(bō)長(cháng)下測量(liáng)培養(yǎng)液(yè)的(dí)吸(xī)光(guāng)度值(zhí)，即可(kě)直接，準確地反推出樣品中活細(xì)胞的相(xiāng)對數量
。細胞增殖越(yuè)快或(huò)毒(dú)性越小，吸光(guāng)度(dù)值(zhí)就越(yuè)高
。
 

二，CCK-8實驗詳(xiáng)細(xì)步驟(zhòu)（以96孔(kǒng)板(bǎn)為例）
 

　　實驗(yàn)前準備(bèi)：
 

　　儀(yí)器(qì)： 酶(méi)標(biāo)儀，CO₂培養箱，超淨(jìng)工(gōng)作台(tái)，移(yí)液(yè)器(qì)
。
 

　　材(cái)料： 96孔細(xì)胞培養板，CCK-8試(shì)劑
。
 

　　細(xì)胞(bāo)： 處於對數(shù)生長期(qī)的健(jiàn)康(kāng)細胞(bāo)
。
 

　　DAY 1
 

　　1. 對前(qián)一(yī)天培(péi)養(yǎng)好的(dí)細胞消(xiāo)化，離心，計數(shù)
。
 

　　2. 在96孔板(bǎn)上(shàng)接種(zhǒng)100μL 3k-7k/孔的細胞(bāo)，在(zài)37℃，5% CO2，90%濕度條件(jiàn)下培(péi)養24小時
。
 

　　DAY 2
 

　　1. 在顯(xiǎn)微鏡下觀察(chá)細(xì)胞生長狀(zhuàng)態(tài)和密度，取生(shēng)長狀態良好，細胞分布(bù)及密度(dù)均一的孔進(jìn)行(háng)實驗(yàn)
。
 

　　2. 配製(zhì)不同濃度梯度(dù)的樣本溶(róng)液(yè)，如(rú)300，100，33.3，11.1，3.7，1.2，0.4，0.14uM
。每(měi)個(gè)濃度三個(gè)復(fù)孔(kǒng)加(jiā)入到(dào)96孔板(bǎn)中，在(zài)37℃，5% CO2，90%濕度條(tiáo)件下培(péi)養(yǎng)適當時間長度
。如(rú)6，12，24或(huò)48小時(shí)
。
 

　　DAY 3/4
 

　　1. CCK8使用(yòng)前在(zài)室(shì)溫下解凍並離心(xīn)
。
 

　　2. 用倒置(zhì)顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)檢(jiǎn)測細(xì)胞生長狀(zhuàng)態，並(bìng)用(yòng)4X/10X取生長狀態良好，細(xì)胞分(fēn)布及密度均一(yī)的(dí)孔拍照(zhào)記(jì)錄
。
 

　　3. 在(zài)每孔中(zhōng)加(jiā)入(rù)10μL的(dí)CCK-8溶液
。
 

　　4. 在37℃，5% CO2，90%濕度(dù)條件(jiàn)下培(péi)養(yǎng)0.5-4小時
。
 

　　5. 用酶標儀在450 nm處測量吸(xī)光(guāng)度(dù)
。
 

　　6. 用Excel及Graphpad Prism處理並分析(xī)結果(guǒ)
。
 

　　7. 結(jié)果(guǒ)示例圖(tú)：
 

　　三，關鍵注意(yì)事項與技(jì)巧(qiǎo)
 

　　l 避(bì)免氣泡： 孔內氣泡會嚴重幹擾讀(dú)數，加樣和檢測前(qián)可(kě)短(duǎn)暫離心(xīn)孔板(bǎn)以(yǐ)去(qù)除(chú)氣(qì)泡(pào)
。
 

　　l 設置復(fù)孔： 建議每(měi)個(gè)實驗(yàn)條(tiáo)件設置至(zhì)少3個(gè)復孔(kǒng)，以確保數據(jù)的統計學意(yì)義(yì)
。
 

　　l 孵育時(shí)間(jiān)優(yōu)化(huà)： 孵育時(shí)間過長會導(dǎo)致顏色過深，超出檢測綫性(xìng)範圍；過(guò)短(duǎn)則信號太弱(ruò)
。必(bì)須通(tōng)過預實(shí)驗摸(mō)索最佳時間
。
 

　　四(sì)，購買建(jiàn)議
 

　　伊萊瑞特代理——天津益元(yuán)利(lì)康(kāng)生(shēng)物科技有(yǒu)限(xiàn)公(gōng)司(sī)，近(jìn)期推出活動(dòng)：
 

　　活(huó)動時(shí)間：2025.10.14-2025.12.31
 

　　增強型細(xì)胞活(huó)力(lì)檢測(cè)試劑盒(hé)(CCK-8)
 

　　貨(huò)號(hào)：E-CK-A362
 

　　規(guī)格:500T
 

　　400元  買一送二!
 

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。