一(yī)，蛋白(bái)在濃(nóng)縮(suō)時出(chū)現了沉(chén)澱，如(rú)何改(gǎi)進？

蛋白如(rú)果濃縮(suō)過(guò)快或者(zhě)過度濃(nóng)縮都有可能(néng)引起蛋(dàn)白沉澱(diàn)
。建議蛋白濃縮後的最(zuì)終濃度不(bù)超(chāo)過20mg/ml
。對(duì)於對(duì)濃縮(suō)速度敏感而容(róng)易沉(chén)澱的(dí)蛋白(bái)，建(jiàn)議的改進方法(fǎ)是：

1）離心力降(jiàng)為推薦(jiàn)離(lí)心(xīn)力的(dí)30%-50%

2）改用截(jié)留(liú)分子量更大的超(chāo)濾(lǜ)管（如原本選(xuǎn)用10k，此(cǐ)時(shí)可以(yǐ)選擇30k） 

3）在濃縮過(guò)程(chéng)中(zhōng)取出超(chāo)濾管，用(yòng)槍(qiāng)頭反(fǎn)復吹吸幾次後再繼續濃縮(suō)

4）體積較(jiào)大的樣品可(kě)考慮(lǜ)選用攪(jiǎo)拌(bàn)式(shì)超濾杯(bēi)，減(jiǎn)少(shǎo)沉澱(diàn)的(dí)發(fā)生(shēng)
。

二，Amicon® Ultra超(chāo)濾(lǜ)管可(kě)以用酒精消(xiāo)毒(dú)滅(miè)菌(jūn)麼？

Amicon® Ultra與70%乙醇是(shì)兼容(róng)的(dí)，但是對(duì)滅(miè)菌處理(lǐ)的具(jù)體(tǐ)方法沒有做相關(guān)的(dí)測試，所(suǒ)以無(wú)法(fǎ)提(tí)供(gōng)更進一步(bù)的參(cān)考信(xìn)息(xī)
。建議(yì)采用(yòng)Ultrafree無菌離心管對濃縮後的樣(yàng)品進(jìn)行過濾除菌
。

三，Amicon® Ultra超(chāo)濾裝置是否可(kě)以用(yòng)於高(gāo)壓(yā)滅(miè)菌？

Amicon® Ultra都(dū)是采用熱封(fēng)設計，不可以用(yòng)高壓高溫滅(miè)菌(jūn)
。

四，懷疑濃縮過(guò)程中目的蛋白和超(chāo)濾(lǜ)膜(mó)之(zhī)間可能存在(zài)非(fēi)特異(yì)性吸附，如(rú)何改善(shàn)？ 

Amicon® Ultra超濾管使用的是再(zài)生(shēng)纖(xiān)維素(sù)膜(mó)，這(zhè)種材(cái)質是蛋白吸附zui低的超(chāo)濾(lǜ)膜
。但是(shì)對(duì)於一些(xiē)疏水性(xìng)蛋白(bái)或非(fēi)極性(xìng)蛋(dàn)白，它們和膜的(dí)非特異吸附可能(néng)會增(zēng)強
。對(duì)於這種情況，可以嘗(cháng)試(shì)在(zài)實驗(yàn)前對(duì)超(chāo)濾(lǜ)管進行(háng)封閉(bì)處(chǔ)理(lǐ)，也可以嘗(cháng)試(shì)換成(chéng)Amicon® Ultra 0.5或2來進(jìn)行實(shí)驗，通(tōng)過減小膜(mó)麵(miàn)積來降(jiàng)低非(fēi)特異性吸(xī)附(fù)
。

五，有時候用超濾離(lí)心管連水(shuǐ)都離不下來，可能(néng)是什(shí)麼原因？

Amicon® Ultra超(chāo)濾膜(mó)中含有(yǒu)微(wēi)量(liáng)甘(gān)油
。如果(guǒ)出(chū)現(xiàn)這(zhè)種(zhǒng)情況，請先(xiān)用0.1 N NaOH清洗(xǐ)再離(lí)心(xīn)
。最後(hòu)用緩(huǎn)衝液或Milli-Q®水(shuǐ)再次(cì)清洗後(hòu)甩幹
。清洗後(hòu)的(dí)濾(lǜ)膜(mó)應(yīng)立即使用，如(rú)暫時(shí)不(bù)用(yòng)，請(qǐng)保持潤濕(shī)狀(zhuàng)態(tài)，避免(miǎn)重(zhòng)新幹燥
。

六，如果(guǒ)要用(yòng)超濾的方(fāng)法(fǎ)分(fēn)離兩種蛋白，那麼這(zhè)兩個蛋(dàn)白的大小(xiǎo)需要(yào)相差多少(shǎo)？

按照經驗，建(jiàn)議(yì)兩(liǎng)個蛋白的(dí)分子(zǐ)量(liáng)要(yào)相差一(yī)個(gè)數量級（10倍）
。

七，說明(míng)書(shū)中推薦在(zài)室(shì)溫下(xià)進行離(lí)心，考(kǎo)慮到蛋(dàn)白(bái)的(dí)穩定性(xìng)，是否可以在4℃進行離(lí)心(xīn)？

可以，但是(shì)低(dī)溫會增加蛋白(bái)樣(yàng)品的粘性(xìng)，導致(zhì)流速減(jiǎn)慢，建議(yì)可(kě)將離(lí)心(xīn)時間延(yán)長到原(yuán)來的1.5倍
。

八(bā)，濃縮(suō)後(hòu)發現濃縮液中沒(méi)有(yǒu)目(mù)的蛋(dàn)白(bái)，可(kě)能的原因有(yǒu)哪些？

首先(xiān)，Amicon® Ultra超濾(lǜ)管(guǎn)的蛋(dàn)白zui低(dī)起始濃(nóng)度(dù)為25ug/ml
。請確保樣本的起始濃度(dù)大於這(zhè)個(gè)濃(nóng)度(dù)
。其(qí)次，如果問題仍(réng)然(rán)出現(xiàn)，請不要丟棄(qì)樣(yàng)本(běn)濾(lǜ)過液(yè)以(yǐ)便(biàn)用(yòng)於分析可能的原(yuán)因：

1）如果目的樣本在濾過(guò)液(yè)中，那麼(mó)請排查(chá)：

  a） 是否選擇了合(hé)適截留(liú)分(fēn)子(zǐ)量的超(chāo)濾(lǜ)管（目(mù)的(dí)蛋白分子(zǐ)量的1/2或者1/3）？

  b）使(shǐ)用的離(lí)心力(lì)是否是在限(xiàn)定範圍內？如果(guǒ)使用的(dí)是rpm，請換算成(chéng)相應的(dí)g離心(xīn)力(lì)，具(jù)體換算方(fāng)法請(qǐng)垂(chuí)詢(xún)
。

  c）離(lí)心機最(zuì)近是(shì)否有校(xiào)準(zhǔn)過？

  d）是否(fǒu)shou次(cì)嘗(cháng)試這(zhè)個(gè)蛋白(bái)？如果能確(què)保用(yòng)同(tóng)樣(yàng)的(dí)超(chāo)濾(lǜ)管對其它(tā)蛋白(bái)成功操作的話，那麼有可(kě)能(néng)是這(zhè)個目(mù)的蛋(dàn)白(bái)的(dí)原(yuán)因
。有(yǒu)時(shí)蛋白會因(yīn)其(qí)本(běn)身的一些(xiē)特(tè)性（構象(xiàng)差(chà)異(yì)）而(ér)影響濃縮(suō)效(xiào)果，建(jiàn)議選用(yòng)更小(xiǎo)截留(liú)分子(zǐ)量(liáng)的超濾管（如原本選(xuǎn)用(yòng)30k，此時(shí)可(kě)以(yǐ)選擇(zé)10k）

2）如果目的樣本也(yě)不在濾(lǜ)過液(yè)中，那(nà)麼(mó)：

  a）蛋(dàn)白樣(yàng)本起(qǐ)始濃度是(shì)否大於25ug/mL？

  b）用來(lái)確定樣本濃度(dù)的方法(fǎ)是什麼？是否(fǒu)可信？

  c）目的(dí)蛋(dàn)白是(shì)不(bù)是沉澱了(liǎo)？如果是，具體解決方(fāng)法請參考上(shàng)麵(miàn)的關(guān)於(yú)蛋白沉(chén)澱問題(tí)的解釋
。

九，產品訂購信息：

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