Wako的(dí)（Lysyl Endopeptidase®, MS Grade，貨號 125-05061）是蛋(dàn)白(bái)質(zhì)組學研究(jiū)中(zhōng)用(yòng)於(yú)質譜樣品前(qián)處理的一款核心工(gōng)具酶。它的(dí)特點(diǎn)是特異性(xìng)高，性(xìng)能(néng)穩定，特別適合與(yǔ)胰蛋白酶(méi)聯用(yòng)以(yǐ)提(tí)升(shēng)蛋(dàn)白(bái)鑒(jiàn)定覆蓋率。

一， Wako的(dí)質(zhì)譜級(jí)賴氨酰肽(tài)鏈(liàn)內切(qiē)酶(méi)核心信息(xī)一覽(lǎn)

二(èr)，Wako的(dí)質(zhì)譜級賴氨(ān)酰肽鏈內(nèi)切酶(méi)產(chǎn)品特性(xìng)與應用優勢

這款(kuǎn)酶之所以(yǐ)在質(zhì)譜分析中表現出色，主要(yào)源於(yú)以(yǐ)下(xià)幾個關鍵技(jì)術優勢：

1. ji致的切(qiē)割特異(yì)性(xìng)：它特(tè)異性水解賴(lài)氨酸（Lys）殘(cán)基C末(mò)端(duān)的肽鍵。與同時(shí)切(qiē)割賴氨(ān)酸(suān)和(hé)精氨酸(suān)的胰蛋白(bái)酶相比(bǐ)，它的酶(méi)切(qiē)產物(wù)通(tōng)常是更(gēng)長的(dí)肽(tài)段(duàn)，這在某些蛋白測序中具(jù)有獨(dú)特-價值(zhí)。

2. 與胰(yí)蛋白酶(méi)聯用，實現(xiàn)“金標(biāo)準"酶切方案：這(zhè)是它最(zuì)核心的(dí)應(yīng)用場(cháng)景。先使(shǐ)用(yòng)Lys-C在含(hán)尿(niào)素的(dí)變性(xìng)條件下進行第(dì)1步切(qiē)割，稀釋後再(zài)用(yòng)胰蛋白酶進行第二(èr)步(bù)切割。這種組(zǔ)合策略能顯著提高酶解效率(shuài)，尤其(qí)是(shì)對膜(mó)蛋白等(děng)難溶(róng)蛋白，可大(dà)幅(fú)提升肽段(duàn)鑒定(dìng)數量和序(xù)列覆蓋率(shuài)。

 3. 出色的(dí)穩定性與(yǔ)兼容(róng)性(xìng)：該酶活性不受4M尿素(sù)或(huò)0.1% SDS等常見(jiàn)變(biàn)性(xìng)劑(jì)的(dí)影響(xiǎng)，這意味(wèi)著它可以適(shì)應復雜的(dí)樣品(pǐn)處理條件。在pH 5.0-12.0範圍(wéi)內(nèi)穩定(dìng)，zui適(shì)反(fǎn)應pH為 9.0-9.5。

4. 顯(xiǎn)著提(tí)升(shēng)質譜(pǔ)數據質量：實驗數據表(biǎo)明，與單(dān)獨使(shǐ)用胰(yí)蛋白(bái)酶相比，Lys-C與胰蛋白酶聯用(yòng)可以(yǐ)將漏切(qiē)位點比(bǐ)例從8%降至3%，同時鑒定(dìng)出(chū)的(dí)多(duō)肽數(shù)量(liáng)從17個增加(jiā)到(dào)22個(gè)，有(yǒu)效提高(gāo)蛋白測序的(dí)覆蓋度。

三(sān)，Wako的(dí)質(zhì)譜級(jí)賴(lài)氨(ān)酰(xiān)肽鏈(liàn)內切(qiē)酶(méi)使(shǐ)用(yòng)要點

溶(róng)解：使用(yòng)前(qián)，將一支（20 µg）凍(dòng)幹粉(fěn)溶(róng)解於 1 mL 的 2 mmol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8) 中，輕輕(qīng)混匀即可。

儲存(cún)：必(bì)須(xū)在(zài) -20°C 條件(jiàn)下(xià)，避光保(bǎo)存，以保(bǎo)持其活(huó)性穩定。

參(cān)考用法（膠內(nèi)酶(méi)切）：凝膠(jiāo)片(piàn)段經脫色(sè)，還(huán)原烷(wán)基化(huà)，脫水幹(gān)燥後(hòu)，用(yòng)含Lys-C的(dí)緩衝(chōng)液(yè)（如(rú)50 mmol/L Tris-HCl, pH 8.5）在(zài)冰(bīng)上充分(fēn)溶(róng)脹(zhàng)，隨(suí)後在(zài) 37°C 下(xià)酶(méi)切過夜，最後(hòu)抽提(tí)肽段(duàn)進(jìn)行質(zhì)譜(pǔ)分析。

四，Wako的(dí)質(zhì)譜(pǔ)級(jí)賴氨(ān)酰(xiān)肽鏈(liàn)內切酶(méi)注(zhù)意事(shì)項

該產品(pǐn)僅(jǐn)用於研(yán)究目(mù)的，不可(kě)用於人(rén)體(tǐ)或臨床診斷。

其來(lái)源菌株水(shuǐ)解無色杆菌根據新的分類學被鑒定為(wéi)產(chǎn)酶溶(róng)杆(gān)菌，這(zhè)並(bìng)不影(yǐng)響(xiǎng)產品性能。

使(shǐ)用時需注意(yì)其(qí)抑(yì)製劑，如DFP，PMSF，TLCK等，避免在(zài)溶(róng)液中加入這(zhè)些物(wù)質。

你(nǐ)是計劃用(yòng)它來(lái)做膠(jiāo)內酶(méi)切(qiē)還是(shì)溶液內酶切？不同的(dí)實(shí)驗流程在步(bù)驟上會(huì)有些差異，可以(yǐ)告(gào)訴(sù)我(wǒ)你的(dí)具體(tǐ)應用，技術人員可(kě)以(yǐ)幫(bāng)你(nǐ)整理更詳(xiáng)細的操作步(bù)驟。

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