Zymo 質(zhì)粒中提/大提(tí)試(shì)劑(jì)盒(hé)采(cǎi)用(yòng)矽膠模(mó)吸附(fù)技術(shù),專一(yī)地(dì)結合質粒(lì)DNA。同(tóng)時(shí)采用特殊(shū)的溶(róng)液P4和(hé)過濾(lǜ)器CS1,可(kě)有效(xiào)的出(chū)去內(nèi)毒(dú)素(sù),蛋白(bái)質(zhì)雜(zá)誌;整個提取過程(chéng)僅(jǐn)需1h,方(fāng)便(biàn)快捷(jié)。使用本試劑(jì)盒提取(qǔ)的質(zhì)粒DNA可適用(yòng)於各種常規操作(zuò),包括酶(méi)切(qiē),PCR,測(cè)序(xù),連接,轉(zhuǎn)化和細(xì)胞(bāo)轉染多(duō)種(zhǒng)細胞等試(shì)驗(yàn)。推(tuī)薦每(měi)次菌液(yè)使(shǐ)用量(liáng):高(gāo)拷(kǎo)貝質粒(lì)推(tuī)薦(jiàn)使(shǐ)用(yòng)量為100ml,得率一般在(zài)500-1500ug左(zuǒ)右;低拷貝質粒(lì)推(tuī)薦使用(yòng)量為(wéi)200ml,得(dé)率(shuài)一(yī)般在200-600ug左(zuǒ)右(yòu)。
Zymo 質粒中(zhōng)提/大提試劑盒注(zhù)意事項(xiàng):請(qǐng)務必(bì)在(zài)使用(yòng)本試劑(jì)盒(hé)之前閱讀此注(zhù)意(yì)事項(xiàng)。
1.溶液P1在使用(yòng)前先加(jiā)入(rù)RNaseA(將(jiāng)試劑盒中(zhōng)提(tí)供的RNaseA全部加(jiā)入(rù)),混(hùn)匀,置(zhì)於2-8℃保(bǎo)存(cún)。
2.使用前(qián)應(yīng)按照試(shì)劑瓶(píng)標簽(qiān)的(dí)說(shuō)明先在(zài)漂(piāo)洗液(yè)PW中(zhōng)加入無水乙醇。
3.使用(yòng)前先檢查平衡(héng)液BL,溶液P2和(hé)P4是(shì)否出(chū)現(xiàn)結晶或者沉(chén)澱,如有結晶或(huò)者(zhě)沉(chén)澱現象(xiàng),可(kě)在37℃水(shuǐ)浴中加(jiā)熱幾(jī)分鐘,即可恢復澄清(qīng)。
4.注意不(bù)要(yào)直接(jiē)接(jiē)觸(chù)溶液P2和P4,使(shǐ)用後應(yīng)立即蓋緊蓋子。
5.使用(yòng)過(guò)濾器時請(qǐng)將推(tuī)柄小(xiǎo)心緩(huǎn)慢地(dì)從過濾管中(zhōng)抽(chōu)出,避免濾(lǜ)膜因壓(yā)力而鬆動(dòng)。
6.提取(qǔ)的質(zhì)粒(lì)量(liáng)與細(xì)菌(jūn)培養濃度(dù),質(zhì)粒拷貝數等(děng)因素有關。如(rú)果所提(tí)質(zhì)粒為(wéi)低拷貝質粒或大於(yú)10kb的大(dà)質(zhì)粒,應加(jiā)大(dà)菌體使(shǐ)用(yòng)量(liáng),同時(shí)按比(bǐ)例(lì)增加(jiā)P1,P2,P4的(dí)用量;洗脫緩衝(chōng)液推薦(jiàn)在65-70℃水(shuǐ)浴中預(yù)熱(rè),可以適當延(yán)長吸(xī)附和洗脫(tuō)時(shí)間(jiān),以提高(gāo)提取效(xiào)率(shuài)。
7.實驗前使用平衡液BL處理(lǐ)吸附(fù)柱,可以激活矽(guī)基質膜,提高得(dé)率。
8.用平衡液處理過的柱(zhù)子(zǐ)建議立即使(shǐ)用,放置時(shí)間(jiān)過長(cháng)會影響(xiǎng)使(shǐ)用效果。