一,RNA效率(shuài)低的(dí)原因(yīn):
1)樣品裂解或匀(yún)漿處(chǔ)理不幹淨(jìng);
2)最後得到(dào)地RNA沉(chén)澱(diàn)未溶解;
3)樣品(pǐn)匀(yún)漿(jiāng)時(shí)加的TRIzol過少;
4)匀漿樣品(pǐn)後(hòu)未在(zài)室溫(wēn)下(xià)放(fàng)至(zhì)5分鐘(zhōng);
5)吸取水相(xiāng)時混(hùn)有(yǒu)有機相(xiāng);
6)RNA沉(chén)澱未溶(róng)解等。
二(èr),A260/A280<1.65的原(yuán)因:
1)檢測(cè)吸光度時,RNA樣(yàng)品不(bù)是(shì)溶於TE,而是溶於(yú)水。低(dī)離子(zǐ)濃(nóng)度(dù)和低PH條件下,A280值會(huì)較(jiào)高(gāo);
2)樣(yàng)品(pǐn)匀漿(jiāng)時(shí)加地試劑量太少(shǎo);
3)匀(yún)漿後樣品未在室(shì)溫放置2分鐘(zhōng);
4)水相中混有(yǒu)有機相(xiāng);
5)最(zuì)後得(dé)到地(dì)RNA沉澱(diàn)未(wèi)溶解;
三(sān),RNA降(jiàng)解原因:
1)組織取出(chū)後沒(méi)有馬上處理或冷(lěng)凍(dòng);
2)樣品或提取(qǔ)地(dì)RNA沉澱(diàn)保存(cún)於(yú)-5℃-20℃,未在(zài)-60℃-70℃保存;
3)細(xì)胞在胰(yí)酶(méi)處理時(shí)被(bèi)破壞;
4)溶液(yè)或(huò)離心管未經RBase去(qù)處理(lǐ);
四(sì),Ezb DNA/RNA/組織提取(qǔ)試劑盒的使用(yòng)注意事項:
1)在進(jìn)行RNA提(tí)取(qǔ)實驗時(shí),使用(yòng)獨立(lì)的RNA提(tí)取專用試驗(yàn)台(tái);
2)實驗(yàn)過程(chéng)中穿好實驗服,佩(pèi)戴一(yī)次(cì)性(xìng)滅菌手(shǒu)套,佩(pèi)戴(dài)口(kǒu)罩(zhào),避免講話(huà)交流等(děng),防(fáng)止您的(dí)唾液和汗液(yè)中的RNaes酶(méi)汙(wū)染(rǎn)實驗(yàn);
3)實驗過程(chéng)中(zhōng)盡(jìn)量使用(yòng)一(yī)次性滅菌(jūn)滅酶(méi)的塑料(liào)器(qì)皿,若(ruò)不(bù)得不使(shǐ)用(yòng)玻(bō)璃器(qì)皿(mǐn),可以選(xuǎn)擇(zé)使用(yòng)0.1%的(dí)DEPC水浸泡(pào)處理(lǐ)24 h後(hòu)再(zài)高壓(yā)滅(miè)菌去除(chú)DEPC,也可以使(shǐ)用幹(gān)熱滅(miè)菌法(fǎ)進行滅菌;
4)RNA提取實驗(yàn)中使(shǐ)用的(dí)所(suǒ)有(yǒu)器具(jù)及耗(hào)材都建(jiàn)議專(zhuān)門使用,並建議耗材設立一個獨(dú)立(lì)的(dí)區(qū)域存放(fàng),不與其(qí)他實(shí)驗(yàn)混用;
5)RNA提取實(shí)驗(yàn)中(zhōng)所(suǒ)用(yòng)的(dí)試(shì)劑(jì)也(yě)應(yīng)專用,不與(yǔ)其他(tā)實驗(yàn)混用(yòng),所(suǒ)用的無菌(jūn)水需要使用0.1%的DEPC處理後進行(háng)高壓(yā)滅菌。
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