誤區(qū)一(yī):穩定(dìng)轉染(rǎn)目(mù)的(dí)基因會(huì)整合到染色體(tǐ),瞬時轉染不會
這個答(dá)案是否定(dìng)的(dí),因為無(wú)論是(shì)瞬(shùn)時轉染還(huán)是(shì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,DNA都(dū)會被(bèi)引(yǐn)入細(xì)胞核並(bìng)以一定的概(gài)率隨機地(dì)整合到宿(sù)主染色體(tǐ);差別在於(yú),穩定(dìng)轉染所使用的質(zhì)粒(lì)含(hán)有(yǒu)抗性(xìng)基(jī)因(yīn),隨後通過藥(yào)物篩(shāi)選,將(jiāng)未轉入(rù)目的基因的(dí)細胞(bāo)消除(chú),留下的(dí)則(zé)是成功轉入(rù)目(mù)的(dí)基因的(dí)細(xì)胞(bāo),因此經過(guò)一(yī)段時(shí)間的藥物篩選,留存(cún)下(xià)來的細胞都(dū)是能夠穩定(dìng)傳遞(dì)的細胞(bāo),稱(chēng)之(zhī)為(wéi)穩定(dìng)轉染;而瞬(shùn)時轉(zhuǎn)染由(yóu)於缺(quē)乏藥物壓(yā)力(lì)篩選,再(zài)加(jiā)上隻有少量細(xì)胞中有目(mù)的(dí)基因整(zhěng)合到(dào)染(rǎn)色體(tǐ),因(yīn)此在傳代過程(chéng)中(zhōng),陽性(xìng)細(xì)胞會逐漸(jiàn)減少(shǎo),導(dǎo)致(zhì)表達(dá)量(liáng)逐漸(jiàn)降低,最終無(wú)法長期(qī)穩定表達。
誤(wù)區二:隻(zhī)有慢(màn)病毒(dú)感染才能構(gòu)建穩(wěn)轉細(xì)胞株
可以用來進行(háng)快速(sù)轉染的(dí)轉(zhuǎn)染方(fāng)法(fǎ),同(tóng)樣(yàng)適(shì)用於構建(jiàn)穩(wěn)定的細(xì)胞株(zhū),例如(rú)電穿孔法(fǎ),化(huà)學試劑轉(zhuǎn)染(rǎn)和慢病(bìng)毒(dú)感染(rǎn)等。隻是(shì)這三(sān)種轉染方法(fǎ)在具體應用上(shàng)可能(néng)會(huì)有一些差(chà)異(yì)。需要特別(bié)注意的(dí)是,在(zài)進(jìn)行RNA轉染時,由於(yú)RNA不需(xū)要進入細(xì)胞(bāo)核(hé),因此(cǐ)通常(cháng)隻(zhī)用(yòng)於短期轉染(rǎn)表達。
誤(wù)區三:構(gòu)建穩轉(zhuǎn)細胞株費時(shí)費(fèi)力,周期長(cháng),不確(què)定性(xìng)高,常(cháng)規實驗室不(bù)方便(biàn)構建
細胞株構(gòu)建需要通過藥(yào)物加壓篩選,與瞬(shùn)轉(zhuǎn)相比(bǐ)周期長(cháng),但(dàn)在進行(háng)科(kē)學(xué)研究(jiū)時,確(què)定(dìng)了(liǎo)一個長(cháng)期(qī)研(yán)究(jiū)的靶標,後(hòu)續都會(huì)針(zhēn)對某一基因(yīn)進(jìn)行(háng)相(xiāng)關實驗,那(nà)麼這(zhè)個(gè)時(shí)候(hòu)構(gòu)建(jiàn)穩轉(zhuǎn)細(xì)胞株就(jiù)顯得尤為必要(yào),畢竟細胞株(zhū)相較於瞬(shùn)轉來說(shuō),最(zuì)大的(dí)優點就(jiù)是(shì)表達穩(wěn)定性高,批(pī)間差異小(xiǎo),實驗(yàn)結(jié)果(guǒ)可(kě)靠性更(gēng)高。
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