一,Moltox菌株(zhū)的(dí)核(hé)心特(tè)點(diǎn)與原理
這些菌(jūn)株經(jīng)過精心設計,具有(yǒu)以下共(gòng)同(tóng)特征,使(shǐ)其能夠靈(líng)敏地檢測出(chū)遺(yí)傳(chuán)毒性物質:
1. 組氨(ān)酸(suān)營養缺陷(xiàn)型(His⁻):
這是(shì)Ames試驗(yàn)的基(jī)礎。這(zhè)些菌株(zhū)自身不能合成(chéng)組氨酸(一(yī)種必(bì)需(xū)氨基(jī)酸),因此(cǐ)在(zài)沒(méi)有組氨酸的(dí)培(péi)養(yǎng)基(jī)上(shàng)無法生(shēng)長形(xíng)成菌(jūn)落(là)。
回復(fù)突變:如果(guǒ)受試(shì)化合(hé)物能(néng)引(yǐn)起DNA突(tū)變(biàn),使菌株恢復(fù)合(hé)成(chéng)組(zǔ)氨酸(suān)的能力(lì)(His⁻ → His⁺),這(zhè)些(xiē)回(huí)復(fù)突變菌就(jiù)能在(zài)無(wú)組氨酸(suān)的培養(yǎng)基上(shàng)生長形成可見的菌落。菌(jūn)落(là)數目的多(duō)少與(yǔ)化合物(wù)的(dí)致突變性強(qiáng)弱(ruò)成正(zhèng)比(bǐ)。
2. 細(xì)胞壁通透(tòu)性增(zēng)強(qiáng)(rfa突變(biàn)):
菌株(zhū)攜(xié)帶`rfa`突變(biàn),導(dǎo)致(zhì)其細胞(bāo)壁外層的脂(zhī)多(duō)糖(táng)(LPS)屏障不完整(zhěng),使得(dé)大分(fēn)子(zǐ)化合物(如(rú)苯並芘(bì)等多(duō)環(huán)芳烴(tīng))更容(róng)易進(jìn)入(rù)細胞(bāo)內(nèi)部(bù),提高(gāo)了(liǎo)檢(jiǎn)測靈敏度。
3. DNA修(xiū)復(fù)係(xì)統缺(quē)陷(xiàn)(ΔuvrB):
菌株缺(quē)失(shī)了`uvrB`基因(yīn),導(dǎo)致(zhì)其切(qiē)除修復係統(tǒng)功(gōng)能(néng)喪(sāng)失。這(zhè)使得(dé)DNA損傷難以(yǐ)被(bèi)正確修復(fù),突變更(gēng)容(róng)易(yì)被固定(dìng)和積累,進一步(bù)增強(qiáng)了檢測的(dí)敏感(gǎn)性。
4. 攜帶(dài)R因子(zǐ)質(zhì)粒(lì)(pKM101):
許多(duō)Moltox菌株(如TA98, TA100)體(tǐ)內(nèi)含(hán)有(yǒu)一(yī)個(gè)名為(wéi)pKM101的質粒。
該質(zhì)粒(lì)能(néng)增強(qiáng)細胞(bāo)的SOS應(yīng)急修復反(fǎn)應(一種容易(yì)出錯(cuò)的修(xiū)復方式(shì)),從而提高對(duì)許多致突變劑(jì)的敏(mǐn)感性。
二,常見的(dí)Moltox菌(jūn)株及其(qí)特性
以下是(shì)一些常用,具代表性的Moltox菌(jūn)株(zhū):
三,Moltox菌株如(rú)何使(shǐ)用:
Ames試(shì)驗流(liú)程簡述
1. 準備菌株:復蘇並培(péi)養Moltox菌株。
2. 製備受試物:將(jiāng)待(dài)測(cè)化(huà)合(hé)物溶解在適當的溶劑中。
3. 混(hùn)合(hé)與誘(yòu)導:將(jiāng)菌液,受試物以及(jí)S9代謝活(huó)化係(xì)統(模擬哺(bǔ)乳(rǔ)動物肝(gān)髒代謝功能,用於(yú)檢(jiǎn)測(cè)前致(zhì)癌物(wù))在頂(dǐng)層瓊脂(zhī)中(zhōng)混合。
4. 鋪板:將混合物倒入低(dī)葡萄糖瓊脂平(píng)板(bǎn)(無組(zǔ)氨(ān)酸)上。
5. 培養:在37°C下培養(yǎng)48-72小時。
6. 計(jì)數:計(jì)數每(měi)板(bǎn)上回變菌落的(dí)數量。
7. 結果判(pàn)定(dìng):如果(guǒ) test substance 組(zǔ)的回(huí)變(biàn)菌(jūn)落數是(shì)陰性對(duì)照組的(dí)兩(liǎng)倍(bèi)或以(yǐ)上,並(bìng)具有劑量-反應(yīng)關係,則判(pàn)定為陽(yáng)性結(jié)果(guǒ)(具(jù)有致突變(biàn)性)。
—— 總(zǒng)結(jié)
Moltox菌株是(shì)Ames試(shì)驗(yàn)的(dí)標準(zhǔn)化(huà),商業化工(gōng)具。
它(tā)們(mén)通過多(duō)重(zhòng)遺(yí)傳修(xiū)飾(組(zǔ)氨(ān)酸缺陷,細胞(bāo)壁(bì)通(tōng)透性增加(jiā),DNA修復缺陷(xiàn),攜(xié)帶R因子(zǐ))來檢測遺傳(chuán)毒性的敏感性。
不(bù)同菌株檢測不同類(lèi)別(bié)的(dí)突變(biàn)(移碼突變(biàn) vs. 鹼(jiǎn)基置(zhì)換(huàn)),因此(cǐ)在(zài)實(shí)踐中(zhōng)通(tōng)常需(xū)要一組(zǔ)菌株(如(rú)TA98, TA100, TA1535, TA97, TA102)來(lái)全(quán)麵評估化合(hé)物的致(zhì)突變(biàn)潛(qián)力(lì)。
這(zhè)些菌株(zhū)為(wéi)全(quán)球的(dí)遺(yí)傳毒理學研究和風險評估(gū)提供了(liǎo)至關(guān)重要,不可(kě)替代(dài)的工(gōng)具。
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