羧(suō)基純(chún)化磁珠(zhū)產(chǎn)品介(jiè)紹：

羧基活(huó)化的(dí) SepFast MAG 用於(yú)製備(bèi)磁(cí)層析介(jiè)質。 它與(yǔ)含有伯(bó)胺基團的配體(tǐ)形成化(huà)學穩(wěn)定的酰(xiān)胺鍵。 它有一個長(cháng)間隔區（9 個(gè)原子(zǐ)）。 目標(biāo)分子(zǐ)結(jié)合(hé)後，磁性樹(shù)脂可(kě)以很容易地在磁(cí)鐵的幫(bāng)助下從(cóng)生物原料中分離出來。 羧基活化(huà)瓊脂(zhī)糖可(kě)用(yòng)於固(gù)定含胺分(fēn)子。 耦合(hé)化學是(shì)基於碳二(èr)亞(yà)胺(àn)的，是一種成功且有(yǒu)據可查(chá)的技術。

羧基純化磁珠(zhū)產(chǎn)品特性(xìng)：

羧基(jī)活(huó)化的 SepFast MAG 4HF 由高(gāo)度(dù)交聯的 4% 瓊脂糖磁性材料製成。 它(tā)使更苛刻(kè)的(dí)操(cāo)作條件(jiàn)成(chéng)為可能(néng)，因此(cǐ)可以應用(yòng)低 pH 值和某些(xiē)高濃(nóng)度有機溶(róng)劑(jì)。 由於瓊(qióng)脂糖(táng)具有(yǒu)出(chū)色(sè)的(dí)親(qīn)水(shuǐ)性和低非(fēi)特異(yì)性結合(hé)特性(xìng)，長期以來(lái)一直用(yòng)於色(sè)譜分離(lí)。 這(zhè)些顆粒(lì)具(jù)有開(kāi)孔結(jié)構，對(duì)大蛋(dàn)白(bái)質(zhì)分子(zǐ)具有出(chū)色(sè)的傳質(zhì)特性。 通過(guò)將長(cháng)的親水(shuǐ)性間(jiān)隔(gé)臂連接(jiē)到骨架(jià)上來(lái)激(jī)活(huó)基礎基質。 它在碳二(èr)亞(yà)胺試(shì)劑存(cún)在下(xià)直接與(yǔ)伯胺(àn)基反(fǎn)應(yīng)。 羧基(jī)活化的 SepFast MAG 以(yǐ) 20% 乙醇(chún)中(zhōng)的(dí)水(shuǐ)懸(xuán)浮(fú)液(yè)形式提(tí)供。

羧基純化(huà)磁珠使(shǐ)用流(liú)程：

1.配(pèi)體(tǐ)固(gù)定化

以下(xià)是配(pèi)體一(yī)般的偶(ǒu)聯流(liú)程(chéng)。

（1）將目標(biāo)配體(tǐ)溶解在(zài)偶聯緩(huǎn)衝液中，將(jiāng)pH值(zhí)調整(zhěng)為(wéi)4.5。偶聯(lián)緩(huǎn)衝液(yè)的體(tǐ)積(jī)可以是固(gù)定凝膠(jiāo)體積的一(yī)半或相同。

（2）在過(guò)濾(lǜ)裝置中用至少5倍體積的(dí)偶(ǒu)聯(lián)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)清洗羧基(jī)活(huó)化凝膠。

（3）將洗(xǐ)淨並吸幹的凝膠（來自步(bù)驟2）轉移到步驟(zhòu)1製備的(dí)溶液中(zhōng)。

（4）將碳二亞(yà)胺(àn)作(zuò)為幹(gān)粉(fěn)或(huò)預先溶解(jiě)的溶(róng)液添(tiān)加(jiā)到漿液中(zhōng)至終濃度為0.1 M。如(rú)果碳二(èr)亞(yà)胺(àn)預先溶(róng)解在水中(zhōng)，則(zé)將pH值調(tiáo)整(zhěng)為4.5。

（5）在室溫(wēn)或4-8℃下(xià)混合(hé)漿料。

（6）在第(dì)1個(gè)小(xiǎo)時內(nèi)通(tōng)過添加 0.1 M NaOH調節(jié)反(fǎn)應pH值至4.5。

（7）將偶(ǒu)聯反應放置2-24小時。

（8）用(yòng)5倍(bèi)體(tǐ)積的(dí)0.1 M醋(cù)酸鹽緩(huǎn)衝液(yè)+0.5M NaCl，pH4.0洗滌凝膠，然後用(yòng)5倍(bèi)體(tǐ)積的0.1 M Tris/HCl+0.5 M NaCl，pH 8.0洗(xǐ)滌凝膠(jiāo)。重(zhòng)復上述洗(xǐ)滌(dí)2次以上。

（9）使(shǐ)用前用(yòng)工作(zuò)/平衡緩衝液清洗凝(níng)膠。

2. 固定化效率的一般考慮

（1）pH

偶(ǒu)聯(lián)反應(yīng)在(zài)pH4.5-7.5之(zhī)間非(fēi)常(cháng)有(yǒu)效地(dì)進(jìn)行。但是(shì)可以(yǐ)優化(huà)偶(ǒu)聯(lián)pH以獲得最(zuì)佳結果（例(lì)如(rú)，高偶(ǒu)聯產(chǎn)率(shuài)和(hé)高配(pèi)體(tǐ)活性）。在偶聯(lián)反應的第(dì)1個小時內(nèi)，pH值會(huì)降低(dī)。要(yào)記得(dé)通過添(tiān)加0.1 M NaOH來(lái)調節偶聯(lián)pH值。之後pH值(zhí)會(huì)趨(qū)於(yú)穩定。

（2）偶(ǒu)聯方案(àn)

去離子水可直接(jiē)用作(zuò)偶(ǒu)聯溶液(yè)。應(yīng)避(bì)免(miǎn)使用含有(yǒu)氨(ān)基(jī)
，巰基(jī)或(huò)羧基的緩(huǎn)衝溶液(yè)，因(yīn)為它們會(huì)與(yǔ)配體偶聯發生(shēng)競爭。可以引入(rù)稀釋的某(mǒu)些有(yǒu)機(jī)溶劑以提高配體的(dí)溶(róng)解(jiě)度。應事先(xiān)測試此類(lèi)溶(róng)劑(jì)的適用(yòng)性。

（3）碳(tàn)二(èr)亞胺(àn)的選擇

應使用水(shuǐ)溶(róng)性碳(tàn)二亞(yà)胺，例如(rú)1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙(bǐng)基)碳二(èr)亞(yà)胺(àn)(EDC)或1‑環己基‑3‑(2‑嗎(má)啉代乙(yǐ)基)碳(tàn)二(èr)亞(yà)胺(àn)(CMC)（通常合成為metho‑p‑甲苯(běn)磺(huáng)酸(suān)鹽）。EDC是常(cháng)用(yòng)的碳(tàn)二亞(yà)胺試劑(jì)。

（4）碳二亞(yà)胺(àn)的濃度(dù)

添(tiān)加(jiā)的碳二亞胺的(dí)量應以(yǐ)化學計(jì)量的(dí)方式超(chāo)過活(huó)化的羧基。建議(yì)以最(zuì)終反應漿料中的0.1 M作(zuò)為起點(diǎn)。

（5）反應(yīng)時間和溫度

可以(yǐ)優化偶聯過程(chéng)中配(pèi)體(tǐ)和(hé)活化填料(liào)之間(jiān)的接觸(chù)時間以保持配體(tǐ)的生(shēng)物活性(xìng)。典(diǎn)型(xíng)的反應(yīng)時間是在室(shì)溫或(huò)冷(lěng)藏室(shì)中過(guò)夜。

（6）屏蔽剩餘的(dí)活化配(pèi)體(tǐ)

如果加入過(guò)量的(dí)配體(tǐ)，則(zé)可能不需要封閉(bì)殘留的活化(huà)基團(tuán)。未與(yǔ)配(pèi)體(tǐ)反應(yīng)的(dí)活(huó)化基團(tuán)應(yīng)在(zài)碳(tàn)二(èr)亞胺(àn)存(cún)在下(xià)通(tōng)過添加額外的含(hán)有(yǒu)pH 8 - 9伯胺的(dí)小(xiǎo)分子（例如1 M乙醇胺(àn)）來(lái)封端(duān)。

（7）最(zuì)終填料(liào)的洗滌

偶(ǒu)聯反(fǎn)應(yīng)後(hòu)需(xū)要將未(wèi)連接(jiē)或弱(ruò)連接(jiē)的配體洗(xǐ)掉。采用高(gāo)pH值和(hé)低pH值(zhí)交替的洗滌(dí)方(fāng)法(fǎ)可以確(què)保(bǎo)有效去(qù)除(chú)不需要的物質(zhì)。

3.固(gù)定(dìng)化(huà)親和填(tián)料的使(shǐ)用(yòng)

配體偶聯填料可用於使用(yòng)間歇(xiē)攪拌罐模式或(huò)填(tián)充柱模(mó)式(shì)的(dí)純(chún)化。處(chǔ)理這種材(cái)料遵(zūn)循(xún)與處理其(qí)他基於(yú)瓊脂糖(táng)基質相(xiāng)同的原則。

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