一，產(chǎn)品(pǐn)簡(jiǎn)介(jiè)

BrainBits小鼠全(quán)腦(nǎo)培(péi)養(yǎng)試劑(jì)盒(hé)，提供(gōng)完整的培(péi)養服(fú)務，包(bāo)含從新(xīn)鮮組織(zhī)開(kāi)始(shǐ)培養所需(xū)的一(yī)切
。E18組織用2ml含(hán)B27的THRYVE胚胎(tāi)儲存介質運送
。立(lì)即使用(yòng)組(zǔ)織能獲得(dé)最高(gāo)的細(xì)胞產量，但注意組(zǔ)織可在(zài)4-8°C下保(bǎo)存一(yī)周
。這(zhè)個試(shì)劑盒是研究人(rén)員為下一代(dài)研究人(rén)員提供(gōng)剛(gāng)剛開(kāi)始(shǐ)的(dí)可能(néng)性的實(shí)踐(jiàn)方(fāng)法，十(shí)分適(shì)用(yòng)於科(kē)研(yán)
。

★產品(pǐn)組分(fēn)：1 E18小(xiǎo)鼠全腦，12mL NbAstro，6.2mg木瓜蛋白(bái)酶，5mL HE-Ca ，1個(gè)帶(dài)橡膠球的火拋光移液(yè)，1對PDL塗層(céng)蓋板
。

二，產(chǎn)品(pǐn)使(shǐ)用

（一）製劑(jì)（無菌罩室(shì)溫(wēn)）

1. 將(jiāng)6mg無菌木瓜蛋白酶(méi)（PAP 6mg）溶(róng)解(jiě)於(yú)3ml THRYVE Embryonic-CaCl中，製備(bèi)細(xì)胞(bāo)解(jiě)離(lí)液，最(zuì)終(zhōng)工作濃度為(wéi)

2毫(háo)克/毫升木瓜(guā)蛋(dàn)白(bái)酶
。在(zài)30℃下孵育(yù)10分鐘使(shǐ)其(qí)溶(róng)解
。放入冰(bīng)箱(xiāng)或冰中備用
。組(zǔ)織(zhī)和(hé)木瓜(guā)蛋白(bái)酶必(bì)須處於(yú)相同的(dí)溫(wēn)度(dù)

（根據(jù)處(chǔ)理組(zǔ)織(zhī)的(dí)數量(liáng)，可能需要幾(jī)個單位）
。

2. 將(jiāng)80µl台(tái)普蘭藍（Sigma T8154）加入0.5ml試管(guǎn)中進(jìn)行第(dì)9步
。

（二）細(xì)胞分散(sàn)（無(wú)菌(jūn)罩室(shì)溫(wēn)）：

1. 用2ml移液(yè)管(guǎn)，用最(zuì)少的培養基小心地(dì)將(jiāng)組(zǔ)織(zhī)轉移到(dào)木瓜蛋白酶上
。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個(gè)新(xīn)的無(wú)菌15ml試管中

保(bǎo)存到步(bù)驟(zhòu)3
。

2. 組織(zhī)與木瓜蛋(dàn)白酶(méi)在(zài)30℃下孵(fū)育(yù)10分(fēn)鐘
。輕輕(qīng)地旋轉每2分鐘或(huò)使(shǐ)用加熱搖振(zhèn)板在30℃和150rpm
。

3. 用2ml移液管從木瓜(guā)蛋白酶中除去(qù)帶(dài)有少量培(péi)養(yǎng)基的組(zǔ)織，並從步驟(zhòu)1中(zhōng)返回(huí)THRYVE胚胎wanquan培(péi)養基
。

4. 使(shǐ)用矽(guī)化(huà)巴(bā)斯德移液器(qì)，將(jiāng)組織分散(sàn)不超過(guò)10倍(bèi)或90%，避免產生氣泡(pào)
。可選：加入(rù)400µl 1mg/ml DNase I溶液(yè)（StemCell Technologies 07469）加(jiā)入(rù)細胞漿(jiāng)液(yè)中，在(zài)室(shì)溫(wēn)下(xià)孵(fū)育(yù)15分鐘，輕彈(dàn)或旋(xuán)轉(zhuǎn)
。

5. 讓(ràng)未(wèi)分散(sàn)的(dí)碎(suì)片靜(jìng)置1分鐘(zhōng)
。

6. 將含(hán)有(yǒu)分散細(xì)胞(bāo)的(dí)上清(qīng)液(yè)轉移到15ml無(wú)菌管中(zhōng)
。留下(xià)約50μl含有碎片的(dí)THRYVE胚(pēi)胎wanquan體
。可選用(yòng)70µm濾池(chí)過(guò)濾細(xì)胞(bāo)液
。

7. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G) 1分(fēn)鐘(zhōng)
。丟棄上清，留下含(hán)有微球的(dí)約50μl THRYVE胚胎(tāi)wanquan液
。

8. 分散細(xì)胞顆粒（用手指(zhǐ)或管輕彈管(guǎn)底(dǐ)部(bù)），重懸於1ml NbActiv1™中
。

9. 取20μl細胞(bāo)液(yè)加入(rù)含有80μl台盼藍（1:5稀釋）的0.5ml試管中(zhōng)，或按(àn)實驗室現(xiàn)行計數程(chéng)序計數
。

10. 使用(yòng)血細胞(bāo)計（計算細胞/ml）或使用當前的(dí)實驗室程序計數細胞(bāo)
。

（三）細胞電(diàn)鍍(dù)（無(wú)菌罩(zhào)室溫）：

1. 用(yòng)NbActiv1™稀(xī)釋0.2ml/cm2的(dí)細胞(bāo)，並以16,000個(gè)細胞/cm2或所(suǒ)需濃(nóng)度進行(háng)板(bǎn)載
。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕(shī)度(dù)（或環(huán)境(jìng)O2）孵(fū)育
。

3. 4天(tiān)後，神經元(yuán)顯示軸突(tū)和樹(shù)突；突(tū)觸(chù)和動(dòng)作電(diàn)位(wèi)開始於7天
。

4. 每3-4天用(yòng)新(xīn)鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一(yī)半(bàn)的培養(yǎng)基(jī)
。

（四）可行(háng)性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）衝洗兩次
。

2. 用15mg/ml雙(shuāng)醋酸(suān)熒光素丙酮原液(yè)和(hé)4.6mg/ml碘(diǎn)化丙(bǐng)啶水原液配製(zhì)染料(liào)混合物(wù)，各稀釋(shì)15µl，加(jiā)入1.5ml HBSS（1:100稀釋(shì)）
。

3. 在(zài)步驟1中加(jiā)入的(dí)0.2ml HBSS中加入(rù)20µl染(rǎn)料混合物（1:10稀(xī)釋）
。

4. 約1分(fēn)鐘後，使用適(shì)合熒光素熒光的(dí)藍(lán)色激(jī)勵(lì)（綠色細(xì)胞(bāo)）計數(shù)活(huó)細(xì)胞
。用綠色(sè)激(jī)勵計數(shù)死(sǐ)細(xì)胞碘化丙啶(dìng)熒光(guāng)（小(xiǎo)紅(hóng)核(hé)）
。

5. 生存(cún)能力(lì)=（綠色(sè)細胞(bāo)/單位(wèi)麵(miàn)積）/（總(zǒng)細胞(bāo)數/單位麵積）或生存(cún)=綠色(sè)細(xì)胞/（綠(lǜ)色+紅(hóng)色細(xì)胞(bāo)）
。

三(sān)，產品目(mù)錄表

三，代(dài)理簡(jiǎn)介

BrainBits小(xiǎo)鼠全腦(nǎo)培(péi)養試劑盒——天津益元利康(kāng)生(shēng)物科(kē)技有(yǒu)限(xiàn)公司(sī)，成立於2018年，坐(zuò)落於(yú)天津經濟技術開發區(qū)
。公司產品綫(xiàn)涉及細(xì)胞與(yǔ)基(jī)因(yīn)治療(liáo)，免疫(yì)學，分子生物學，細胞生物學等多(duō)個方向，專注(zhù)於(yú)生(shēng)命(mìng)科(kē)學試劑，耗材，細胞(bāo)，儀器等產品銷售(shòu)，經營的(dí)品牌主(zhǔ)要有(yǒu)：ThermoFisher，Sigma，Qiagen，EZBioscience，ZYMO Research，MedKoo，Abcam等等
。我(wǒ)們(mén)提供質優(yōu)價美(měi)的產品，及時(shí)到(dào)位的服務(wù)，努(nǔ)力成長為生命科(kē)學(xué)和(hé)生(shēng)物(wù)技術(shù)企業的(dí)優(yōu)質(zhì)供應商(shāng)
。