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產(chǎn)品中(zhōng)心
產品簡介
BrainBits小(xiǎo)鼠(shǔ)下(xià)丘(qiū)腦(nǎo)培(péi)養試劑盒，包(bāo)含從新鮮(xiān)組織開(kāi)始培養(yǎng)所(suǒ)需(xū)的(dí)一(yī)切(qiē)。E18組(zǔ)織(zhī)用2ml含(hán)B27的THRYVE胚胎儲存(cún)介(jiè)質(zhì)運(yùn)送。
產品分類(lèi)
一(yī)，產品簡(jiǎn)介
BrainBits小鼠下(xià)丘腦培(péi)養試劑(jì)盒(hé)，產品組分：1 E18小鼠下丘腦，12mL NbAstro，6.2mg木瓜蛋(dàn)白(bái)酶，5mL HE-Ca ，1個帶(dài)橡膠(jiāo)球的火(huǒ)拋光(guāng)移液(yè)，1對(duì)PDL塗層(céng)蓋板(bǎn)。
二(èr)，產品(pǐn)使(shǐ)用
（一(yī)）製(zhì)劑(jì)（無(wú)菌(jūn)罩(zhào)室溫(wēn)）
1. 將6mg無菌(jūn)木瓜蛋(dàn)白(bái)酶（PAP 6mg）溶(róng)解於(yú)3ml THRYVE Embryonic-CaCl中(zhōng)，製備細胞解(jiě)離液，最(zuì)終工作濃(nóng)度為(wéi)
2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵(fū)育10分鐘(zhōng)使其(qí)溶解(jiě)。放(fàng)入冰(bīng)箱或冰中(zhōng)備(bèi)用。組(zǔ)織和木瓜蛋(dàn)白(bái)酶(méi)必須(xū)處於相(xiāng)同的(dí)溫度
（根(gēn)據處(chǔ)理組織(zhī)的(dí)數(shù)量，可(kě)能需要(yào)幾個單位）。
2. 將80µl台普(pǔ)蘭藍（Sigma T8154）加入0.5ml試管中(zhōng)進行第(dì)9步。
（二）細(xì)胞分(fēn)散(sàn)（無菌罩室(shì)溫）：
1. 用2ml移液(yè)管，用最(zuì)少(shǎo)的(dí)培養(yǎng)基小心(xīn)地將組織(zhī)轉移(yí)到(dào)木瓜(guā)蛋白酶上。將(jiāng)THRYVE胚胎wanquan移植到(dào)一個新的無菌15ml試管中
保(bǎo)存到步(bù)驟(zhòu)3。
2. 組織(zhī)與木瓜蛋白(bái)酶(méi)在30℃下(xià)孵育(yù)10分鐘。輕輕地旋轉每2分(fēn)鐘或使(shǐ)用加熱搖(yáo)振(zhèn)板在30℃和150rpm。
3. 用(yòng)2ml移液管從(cóng)木瓜(guā)蛋白酶(méi)中(zhōng)除(chú)去(qù)帶有少量培養基的組織(zhī)，並從步(bù)驟(zhòu)1中(zhōng)返回THRYVE胚(pēi)胎wanquan培(péi)養(yǎng)基(jī)。
4. 使(shǐ)用(yòng)矽(guī)化(huà)巴(bā)斯德(dé)移(yí)液器，將(jiāng)組織(zhī)分(fēn)散(sàn)不超過10倍(bèi)或90%，避免產(chǎn)生氣(qì)泡。可選：加(jiā)入(rù)400µl 1mg/ml DNase I溶液（StemCell Technologies 07469）加(jiā)入細(xì)胞(bāo)漿液中，在室溫下孵育(yù)15分(fēn)鐘(zhōng)，輕彈(dàn)或旋轉(zhuǎn)。
5. 讓(ràng)未分(fēn)散的碎片靜(jìng)置1分(fēn)鐘。
6. 將含有(yǒu)分散細胞的(dí)上(shàng)清(qīng)液(yè)轉(zhuǎn)移到15ml無菌管(guǎn)中(zhōng)。留下(xià)約50μl含(hán)有(yǒu)碎(suì)片(piàn)的(dí)THRYVE胚(pēi)胎wanquan體(tǐ)。可(kě)選用70µm濾池過(guò)濾細胞液。
7. 旋(xuán)轉1100rpm (200 x G) 1分(fēn)鐘。丟棄上清，留下(xià)含有微球的約(yuē)50μl THRYVE胚胎wanquan液(yè)。
8. 分(fēn)散(sàn)細胞顆粒(lì)（用手指(zhǐ)或管輕彈管底(dǐ)部(bù)），重懸於(yú)1ml NbActiv1™中。
9. 取(qǔ)20μl細(xì)胞液加(jiā)入含有80μl台(tái)盼藍（1:5稀(xī)釋(shì)）的0.5ml試(shì)管中，或按(àn)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行計(jì)數(shù)程序計(jì)數。
10. 使用(yòng)血(xiě)細胞計（計算(suàn)細(xì)胞/ml）或(huò)使(shǐ)用(yòng)當(dāng)前的(dí)實驗室程(chéng)序(xù)計數(shù)細(xì)胞。
（三）細胞(bāo)電(diàn)鍍（無菌罩室溫(wēn)）：
1. 用NbActiv1™稀釋(shì)0.2ml/cm2的細(xì)胞，並以(yǐ)16,000個(gè)細胞/cm2或(huò)所需濃度(dù)進(jìn)行板(bǎn)載。
2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或(huò)環(huán)境(jìng)O2）孵(fū)育(yù)。
3. 4天後(hòu)，神經(jīng)元顯(xiǎn)示軸突(tū)和(hé)樹(shù)突；突(tū)觸和(hé)動作(zuò)電(diàn)位開(kāi)始於7天(tiān)。
4. 每(měi)3-4天用(yòng)新(xīn)鮮的37℃CO2平(píng)衡NbActiv1™更(gēng)換一半(bàn)的(dí)培(péi)養(yǎng)基。
（四）可(kě)行性分(fēn)析(xī):
1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物(wù)）衝(chōng)洗(xǐ)兩次。
2. 用(yòng)15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和(hé)4.6mg/ml碘化(huà)丙啶水(shuǐ)原液(yè)配製(zhì)染(rǎn)料混合(hé)物，各(gè)稀釋15µl，加(jiā)入(rù)1.5ml HBSS（1:100稀(xī)釋(shì)）。
3. 在步驟(zhòu)1中(zhōng)加(jiā)入的(dí)0.2ml HBSS中加(jiā)入20µl染(rǎn)料混合物（1:10稀釋）。
4. 約(yuē)1分鐘(zhōng)後，使用適(shì)合熒光素熒光(guāng)的藍(lán)色(sè)激(jī)勵（綠(lǜ)色細(xì)胞）計數活細胞(bāo)。用(yòng)綠色激勵計(jì)數(shù)死細(xì)胞碘(diǎn)化(huà)丙啶(dìng)熒光(guāng)（小(xiǎo)紅(hóng)核(hé)）。
5. 生(shēng)存能力=（綠色細胞(bāo)/單(dān)位麵(miàn)積）/（總細胞數(shù)/單(dān)位(wèi)麵積）或(huò)生(shēng)存(cún)=綠色細胞/（綠色+紅色細胞(bāo)）。
三(sān)，產(chǎn)品目(mù)錄表
SKU | 產品(pǐn)名(míng)稱 | 產品品(pǐn)牌 |
KTC57EHT | 小鼠下丘(qiū)腦培(péi)養試劑(jì)盒 | Transnetyx Tissue BrainBits |
三(sān)，代理(lǐ)簡介
BrainBits小鼠(shǔ)下丘腦(nǎo)培養試(shì)劑盒(hé)——天(tiān)津益元(yuán)利康生(shēng)物科(kē)技(jì)有(yǒu)限公司！
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