懸浮(fú)細胞傳代是一(yī)項重要的實驗(yàn)操(cāo)作,它可(kě)以幫(bāng)助研究(jiū)人員(yuán)擴增和維持細胞株。懸浮細(xì)胞(bāo)如何進行傳(chuán)代呢(ní)
？

一(yī)，懸浮細胞(bāo)的傳代(dài)

懸浮細胞(bāo)傳(chuán)代比貼(tiē)壁細(xì)胞傳代稍(shāo)微簡單(dān)一些。由於(yú)細(xì)胞(bāo)已經(jīng)在生(shēng)長(cháng)培養(yǎng)基中(zhōng)懸浮
，因(yīn)此無需通(tōng)過酶的作用使其從培(péi)養容器表(biǎo)麵脫(tuō)離
，整(zhěng)個過程較為迅(xùn)速
，對(duì)細胞的損(sǔn)傷也(yě)較小。懸(xuán)浮(fú)生長細胞的傳(chuán)代(dài)培(péi)養要比貼壁(bì)細(xì)胞(bāo)簡單(dān)得(dé)多(duō)
，通常有(yǒu)兩(liǎng)種方法(fǎ)。

1. 直接給(gěi)帶(dài)傳代的培(péi)養(yǎng)瓶中補(bǔ)充(chōng)一(yī)定(dìng)量(liáng)的新鮮.培養基
，然後將進(jìn)行(háng)分裝(zhuāng)。

2. 先通過離心(xīn)棄掉營養(yǎng)匱(kuì)乏(fá)的(dí)舊(jiù)培養基
，然後再用適量的新鮮培(péi)養基(jī)重懸細(xì)胞(bāo)沉澱
，最後將其(qí)分裝至(zhì)培養瓶(píng)中即(jí)可。

懸浮細胞傳代後(hòu)的延(yán)滯期(qī)一般(bān)比貼(tiē)壁(bì)細胞短(duǎn)。

二(èr)，所(suǒ)需材(cái)料(liào)

★ 裝(zhuāng)有(yǒu)懸(xuán)浮細(xì)胞的培養(yǎng)容(róng)器

★ 完quan生(shēng)長(cháng)培養(yǎng)基(jī)
，預(yù)熱至(zhì)37%

★ 37°培(péi)養箱(xiāng)
，充有(yǒu)二(èr)氧化(huà)碳濃(nóng)度為(wéi)5%的(dí)濕(shī)化(huà)空氣

三，懸(xuán)浮細胞(bāo)傳(chuán)代流程

所有與細胞接觸(chù)的溶液(yè)和設(shè)備(bèi)均應為無菌(jūn)狀(zhuàng)態(tài)必(bì)須(xū)采用正確的無(wú)菌(jūn)技(jì)術
，並且(qiě)在超淨(jìng)台內進行(háng)。傳代應在細(xì)胞(bāo)處於(yú)對(duì)數期，未達到(dào)匯(huì)合狀態時進行。達到匯(huì)合狀態時(shí)
，懸浮培(péi)養的(dí)細(xì)胞會聚(jù)集(jí)成(chéng)團塊
，轉動(dòng)培(péi)養瓶(píng)時(shí)培養基(jī)會變得渾濁(zhuó)。傳(chuán)代前所建(jiàn)議的最大(dà)細胞密(mì)度隨細胞係(xì)不同(tóng)而有所差異;詳細(xì)信息請參閱針對具體細(xì)胞(bāo)的(dí)立品(pǐn)說明(míng)書或操(cāo)作(zuò)手(shǒu)冊。

四，懸浮細胞(bāo)的傳代(dài)方法(fǎ)

1，直接傳代法(fǎ)

①待懸浮細胞長滿(mǎn)至(zhì)80%-90%左右 (細(xì)胞(bāo)懸液(yè)變黃)
，即(jí)可傳代(dài)；

②用(yòng)吸(xī)管吸棄細(xì)胞懸液1/2~ 2/3 ；

③加入適量(liáng)的(dí)新鮮(xiān)培養(yǎng)基
，繼(jì)續培養(yǎng)。

2，離心(xīn)傳代(dài)法(fǎ)

①將(jiāng)細(xì)胞懸(xuán)液轉移(yí)到(dào)離(lí)心管內(nèi)；

②150g離心5min
，棄上清；

③使用(yòng)新(xīn)鮮(xiān)的培(péi)養基(jī)重懸細胞;

④吸(xī)管吸取(qǔ)適量細胞懸液
，裝入(rù)新(xīn)的培(péi)養瓶(píng)
，再(zài)加入(rù)適(shì)量(liáng)的新(xīn)鮮(xiān)培養(yǎng)基
，繼(jì)續(xù)培養(yǎng)。

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