蛋白(bái)定量(liáng)是(shì)蛋(dàn)白分離(lí)和分(fēn)析前必須(xū)的一個重(zhòng)要步驟，蛋白色譜分(fēn)離，蛋(dàn)白質(zhì)電泳(yǒng)分(fēn)析(xī)，蛋白質(zhì)免(miǎn)疫分(fēn)離和(hé)分析，細胞裂解釋(shì)放的總蛋白(bái)定(dìng)量(liáng)，蛋白分(fēn)子的標記，蛋白結構分析(xī)等，都(dū)需要可靠(kào)的(dí)定(dìng)量分(fēn)析(xī)作(zuò)為基礎。蛋白定(dìng)量(liáng)分析(xī)應用(yòng)的領域包括(kuò)生(shēng)物(wù)科(kē)學(xué)，食品(pǐn)檢驗，臨(lín)床檢(jiǎn)驗(yàn)等等。蛋(dàn)白質定量(liáng)有(yǒu)哪(nǎ)些方法
？讓我們一起來看看吧(bā)！

一(yī)，比色法

蛋白定(dìng)量(liáng)常使用(yòng)的(dí)方(fāng)法是(shì)比色法，通(tōng)常(cháng)用(yòng)於總蛋(dàn)白的(dí)定量(liáng)分析(xī)。根據(jù)蛋(dàn)白和比色(sè)試劑(jì)的(dí)結合，可(kě)以(yǐ)將(jiāng)比(bǐ)色法分(fēn)為
：蛋白(bái)-染料結合(hé)法和蛋白(bái)-銅螯(áo)合(hé)化學試(shì)劑法。前者(zhě)對(duì)應(yīng)的典型蛋(dàn)白定(dìng)量(liáng)比(bǐ)色(sè)法是(shì)考馬斯(sī)亮藍(lán)G250染料結合法(fǎ)，後者則(zé)包括雙縮脲法，Lowry法，二(èr)喹(kuí)啉(lán)甲(jiǎ)酸（BCA）法(fǎ)。

1，Bradford法

Bradford法(fǎ)也稱作考馬斯亮藍(lán)法，是由Bradford於1976年建(jiàn)立的(dí)。該(gāi)方法的原(yuán)理(lǐ)是蛋(dàn)白(bái)在酸(suān)性條(tiáo)件(jiàn)下(xià)和考(kǎo)馬斯(sī)染(rǎn)料結合(hé)，染料的最大吸收(shōu)值發生改變，從(cóng)465nm轉移(yí)為(wéi)610nm，並(bìng)且在(zài)595nm處有最(zuì)大(dà)的(dí)吸(xī)收差異(yì)。結合到蛋白質分(fēn)子上(shàng)的染(rǎn)料(liào)數(shù)與蛋(dàn)白(bái)所帶(dài)正(zhèng)電荷成正比，因此(cǐ)可(kě)以(yǐ)用該方法(fǎ)來對蛋白進行(háng)定(dìng)量(liáng)。染(rǎn)料的顏(yán)色變(biàn)化(huà)和(hé)蛋(dàn)白中的(dí)鹼(jiǎn)性氨(ān)基(jī)酸(suān)（精氨酸(suān)，賴氨酸和組(zǔ)氨(ān)酸(suān)）有(yǒu)關，另(lìng)外範德華力和(hé)疏水作用也(yě)會影響(xiǎng)蛋白與(yǔ)染料的(dí)結合。

2， BCA法

BCA (bicinchonininc acid) 1985年Paul K. Smith等人(rén)開(kāi)發(fā)出BCA方法(fǎ)，該(gāi)方(fāng)法(fǎ)分為兩步(bù)
：首先(xiān)，在鹼(jiǎn)性(xìng)條(tiáo)件(jiàn)下，蛋白將(jiāng)二價銅(tóng)離子還原為(wéi)一價銅離子，然(rán)後(hòu)，BCA和(hé)一價銅離(lí)子(zǐ)結合，形成(chéng)紫色(sè)化合(hé)物，該(gāi)化(huà)合物在562nm時有最大吸收(shōu)，且吸收值與蛋白濃(nóng)度(dù)呈(chéng)綫性(xìng)相(xiāng)關(guān)。

二，紫(zǐ)外(wài)法

紫外法(fǎ)也是常(cháng)用(yòng)的(dí)蛋白(bái)定量(liáng)方法之(zhī)一，該方(fāng)法在簡單的分光(guāng)光(guāng)度計中就(jiù)可以(yǐ)定量測定溶液中蛋(dàn)白(bái)質的含(hán)量。蛋白質對近(jìn)紫外光的(dí)吸收(shōu)依(yī)賴於酪(lào)氨酸（Tyr）和色氨(ān)酸（Trp）含量，同(tóng)時在(zài)很(hěn)小的(dí)程度(dù)上也會(huì)受(shòu)到(dào)苯丙氨酸(suān)（Phe）和二硫(liú)鍵(jiàn)數(shù)量的影(yǐng)響。因此，蛋(dàn)白(bái)質之(zhī)間(jiān)A280的(dí)吸(xī)收(shōu)值相差很大，對於濃度為(wéi)1 mg/mL的溶液，從(cóng)0到4的數值都有(yǒu)，大多(duō)蛋白(bái)的吸(xī)收(shōu)值(zhí)在0.5 - -1.5的範圍(wéi)之(zhī)間(jiān)。

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