在(zài)細胞(bāo)培養(yǎng)過程中(zhōng)
，去除原培(péi)養基(jī)並將細胞(bāo)從原培(péi)養(yǎng)體係轉移到新(xīn)鮮(xiān)的培(péi)養基中
，維持(chí)細(xì)胞的(dí)活力與(yǔ)增(zēng)殖(zhí)。細胞(bāo)傳(chuán)代(dài)既可(kě)以擴大(dà)細胞培養(yǎng)量(liáng)
，也(yě)能夠避(bì)免細胞因進入平台期而(ér)出(chū)現生長抑(yì)製甚至死亡(wáng)的(dí)情況。那麼你知道細胞(bāo)傳代的實(shí)驗(yàn)步(bù)驟(zhòu)是(shì)什(shí)麼嗎？有(yǒu)何注意(yì)事項呢？讓我們(mén)一起來看(kàn)看吧(bā)！

一
，實(shí)驗(yàn)步(bù)驟

1. 貼(tiē)壁細胞(bāo)的傳(chuán)代:

1) 倒置顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)下(xià)觀察(chá)細胞(bāo)形態(tài)及(jí)密度
，評(píng)估(gū)細胞(bāo)的(dí)狀態
，以(yǐ)作為傳代比(bǐ)例(lì)的參考(kǎo)。

2) 提前(qián)紫(zǐ)外(wài)殺(shā)菌(jūn)（至(zhì)少30min為(wéi)宜）操作台及實驗(yàn)材料(liào)。

3) 注(zhù)意(yì)無菌操作
，在(zài)操(cāo)作台中吸(xī)除(chú)或倒(dǎo)掉培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)內舊培(péi)養(yǎng)液（盡可能去除(chú)幹淨
，鈣離子(zǐ)
，鎂(měi)離子和血清(qīng)蛋(dàn)白的(dí)存(cún)在(zài)會(huì)降(jiàng)低胰酶活(huó)力(lì)）。

4) 加入(rù)適量PBS緩衝液(yè)洗滌1~2次。

5) 加入1~2 mL胰酶（以(yǐ)全部(bù)覆蓋(gài)細(xì)胞為準(zhǔn)）
，輕(qīng)輕(qīng)晃動培養皿
，使胰(yí)酶充分(fēn)接觸細胞（建(jiàn)議：胰(yí)酶(méi)分裝成(chéng)適量
，提前水(shuǐ)浴復溫到37℃）。

6) 顯微(wēi)鏡下(xià)觀(guān)察細胞(bāo)：倒置顯(xiǎn)微鏡(jìng)下觀(guān)察細(xì)胞
，當細胞變(biàn)圓且(qiě)大多(duō)數細胞脫落(là)時
，表明此時(shí)細胞消化(huà)適度（加入胰酶後(hòu)
，邊計(jì)時(shí)邊顯微鏡下觀察
，記錄(lù)細(xì)胞消化(huà)的時(shí)間
，供(gōng)今後(hòu)細(xì)胞消化參(cān)考）

7) 加入2~3 mL 含血清完(wán)quan培養液（也可以考(kǎo)慮(lǜ)使用該細(xì)胞本(běn)次的培(péi)養(yǎng)上(shàng)清(qīng)）
，終(zhōng)止(zhǐ)消化
，輕柔吹(chuī)打
，使(shǐ)細胞(bāo)完quan脫(tuō)落。

8) 收(shōu)集(jí)細胞(bāo)懸(xuán)液(yè)
，轉(zhuǎn)移(yí)至離心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)
，1500 rpm 離心5 min（必要時可以(yǐ)考慮
，低速(sù)
，短時(shí)間的(dí)離心有助於去除細胞碎片(piàn)
，細菌汙染等）。

9) 棄(qì)去(qù)上(shàng)清液
，加入(rù)適量(liáng)體積(jī)含血(xiě)清培(péi)養液
，重懸細胞(bāo)
，根(gēn)據細胞(bāo)生(shēng)長速(sù)度
，是(shì)否有(yǒu)密(mì)度依(yī)賴(lài)性及計劃(huá)傳代(dài)的(dí)時間等特(tè)點
，按照(zhào)比(bǐ)例將細胞懸液(yè)分裝入(rù)2個或多(duō)個無菌培(péi)養皿(mǐn)/培養瓶內(nèi)
，培養(yǎng)皿內可預(yù)先加入(rù)適量(liáng)培養(yǎng)基。注意(yì)細胞充(chōng)分混匀(yún)
，保證(zhèng)細(xì)胞均匀(yún)分(fēn)布。 

2. 懸浮細(xì)胞(bāo)的(dí)傳(chuán)代(dài)：可通(tōng)過離(lí)心收(shōu)集後(hòu)用含血清的培養基直接傳代(dài)。

二
，注(zhù)意事項(xiàng)

1. 嚴格(gé)無菌(jūn)操(cāo)作(zuò)！

2. 適度消化：提前復溫胰酶37℃以及(jí)消(xiāo)化計時
，易(yì)保證(zhèng)消化(huà)過程(chéng)穩定(dìng)。消化(huà)時間過長(cháng)
，容易影(yǐng)響(xiǎng)細(xì)胞狀態(tài)及(jí)活性(xìng)
，消(xiāo)化時間(jiān)過短易多細(xì)胞(bāo)成(chéng)團
，影(yǐng)響實(shí)驗效果。

3.吹(chuī)打過程要(yào)輕柔
，避(bì)免細胞(bāo)液的灑濺(jiàn)。

更(gēng)多有(yǒu)關細胞(bāo)傳(chuán)代(dài)的實(shí)驗(yàn)步(bù)驟(zhòu)和(hé)注(zhù)意(yì)事項(xiàng)問(wèn)題(tí)
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