熒光原(yuán)位雜(zá)交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是(shì)一門新(xīn)興的分(fēn)子細胞遺傳學技(jì)術(shù)，是(shì) 20 世紀(jì) 80 年代(dài)末期(qī)在(zài)原有的放射(shè)性原(yuán)位(wèi)雜交技術的(dí)基礎上發(fā)展(zhǎn)起來(lái)的一(yī)種非(fēi)放射性原(yuán)位(wèi)雜交(jiāo)技(jì)術。目(mù)前這項技術(shù)已(yǐ)經廣(guǎng)泛(fàn)應用(yòng)於動(dòng)植物基(jī)因(yīn)組(zǔ)結構研(yán)究，染色(sè)體(tǐ)精細(xì)結構變(biàn)異分析(xī)，病毒(dú)感(gǎn)染分析，人(rén)類產前診(zhěn)斷，腫瘤遺傳(chuán)學(xué)和基(jī)因組(zǔ)進(jìn)化(huà)研究待許(xǔ)多領域。那麼你知道(dào)熒(yíng)光原位雜(zá)交(jiāo)實驗(yàn)的原理是(shì)什麼嗎？讓我們一(yī)起來看(kàn)看吧！

熒(yíng)光(guāng)原位(wèi)雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一(yī)門新興的分(fēn)子細胞(bāo)遺(yí)傳(chuán)學技術，是(shì) 20 世紀(jì) 80 年(nián)代末期在原有的放(fàng)射性(xìng)原(yuán)位雜交(jiāo)技(jì)術(shù)的(dí)基礎(chǔ)上發展起(qǐ)來(lái)的(dí)一種(zhǒng)非放射(shè)性(xìng)原(yuán)位雜(zá)交(jiāo)技(jì)術(shù)。目(mù)前這項技(jì)術已經(jīng)廣泛應用(yòng)於動植物(wù)基因(yīn)組結構研(yán)究，染色體精細(xì)結構變異分(fēn)析，病毒感染分析(xī)，人(rén)類產前診斷(duàn)，腫瘤(liú)遺(yí)傳學和基因組進(jìn)化研究待(dài)許(xǔ)多領域(yù)。FISH的(dí)基本(běn)原理(lǐ)是用已(yǐ)知(zhī)的(dí)標記單(dān)鏈核酸(suān)為(wéi)探針，按照(zhào)鹼(jiǎn)基(jī)互補(bǔ)的原則(zé)，與(yǔ)待(dài)檢材料(liào)中未知的單鏈核(hé)酸進(jìn)行(háng)異(yì)性(xìng)結(jié)合，形(xíng)成(chéng)可被(bèi)檢測的雜交雙鏈核酸。由(yóu)於 DNA 分(fēn)子在染色(sè)體上是沿著(zhuó)染(rǎn)色體縱軸(zhóu)呈(chéng)綫性排列(liè)，因(yīn)而可以探針直接與染色(sè)體(tǐ)進行雜交從而將特定(dìng)的(dí)基(jī)因在(zài)染色體上定(dìng)位(wèi)。與(yǔ)傳(chuán)統(tǒng)的放(fàng)射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原(yuán)位雜(zá)交(jiāo)具有快(kuài)速，檢測信(xìn)號強，雜(zá)交特異性高(gāo)和可(kě)以(yǐ)多重(zhòng)染色等(děng)特(tè)點(diǎn)，因此在(zài)分子(zǐ)細(xì)胞(bāo)遺傳學(xué)領域受(shòu)到(dào)普遍(biàn)關(guān)注。

雜交所(suǒ)用(yòng)的探(tàn)針大(dà)致可(kě)以(yǐ)分類三(sān)類：

1.染色體特異(yì)重復序(xù)列(liè)探針，例如α衛(wèi)星，衛星III類的探針，其雜交靶位常(cháng)大於1Mb，不含散在重(zhòng)復序(xù)列(liè)，與靶(bǎ)位結(jié)合緊(jǐn)密(mì)，雜(zá)交信號強，易(yì)於檢(jiǎn)測；

2.全染色體或染(rǎn)色體(tǐ)區域特異性探針，其(qí)由一條染色體或染(rǎn)色(sè)體上某一(yī)區段(duàn)上ji端(duān)不(bù)同的核苷酸片段(duàn)所(suǒ)組成，可(kě)由克隆到噬菌體(tǐ)和質(zhì)粒(lì)中的染(rǎn)色體(tǐ)特異(yì)大(dà)片段(duàn)獲(huò)得；

3.特異性位(wèi)置(zhì)探針(zhēn)，由(yóu)一(yī)個或(huò)幾(jī)個克隆序(xù)列組(zǔ)成(chéng)。

探(tàn)針的熒光素標記(jì)可以(yǐ)采(cǎi)用(yòng)直(zhí)接(jiē)和間接(jiē)標(biāo)記(jì)的(dí)方(fāng)法。間(jiān)接標記(jì)是采用生物(wù)素(sù)標(biāo)記DNA探(tàn)針(zhēn)，雜(zá)交之(zhī)後(hòu)用藕(ǒu)聯(lián)有(yǒu)熒(yíng)光(guāng)素(sù)親和素(sù)或(huò)者(zhě)鏈(liàn)黴親(qīn)和素進(jìn)行檢測(cè)，同(tóng)時還(huán)可(kě)以(yǐ)利(lì)用(yòng)親(qīn)和素-生物素(sù)-熒(yíng)光(guāng)素復合(hé)物(wù)，將(jiāng)熒光信(xìn)號進行(háng)放大，從而可以檢測(cè) 500bp 的(dí)片段。而直(zhí)接標記(jì)法(fǎ)是將熒光素直接(jiē)與探針核苷(gān)酸(suān)或(huò)磷酸戊(wù)糖(táng)骨架共價結合，或在(zài)缺口(kǒu)平移(yí)法(fǎ)標記探針(zhēn)時將(jiāng)熒(yíng)光素核(hé)苷(gān)三(sān)磷酸(suān)摻入。直接標記(jì)法在(zài)檢測時步驟(zhòu)簡單，但由(yóu)於(yú)不能進行(háng)信號放大(dà)，因此(cǐ)靈(líng)敏度(dù)不(bù)如(rú)間(jiān)接標(biāo)記的方法(fǎ)。

更多有(yǒu)關熒光(guāng)原位(wèi)雜交的實驗原(yuán)理，請聯(lián)係天(tiān)津益元利(lì)康(kāng)生物(wù)科(kē)技有(yǒu)限公(gōng)司：