你知(zhī)道(dào)引物(wù)的純化方法有(yǒu)哪些嗎(má)？讓(ràng)我們一起(qǐ)來看看吧(bā)！

一，脫鹽

寡(guǎ)核苷酸(suān)合(hé)成後(hòu)，為(wéi)了(liǎo)純(chún)化(huà)寡核(hé)苷酸(suān)成為天(tiān)然(rán)的DNA結構，首(shǒu)先(xiān)必須(xū)去除保護(hù)基團。通(tōng)過(guò)濃(nóng)氨水處(chǔ)理(lǐ)，合成的寡(guǎ)核(hé)苷(gān)酸(suān)從固相載體上分離，2-氰乙(yǐ)氧(yǎng)基--磷(lín)酸二(èr)脂(zhī)鍵的(dí)保(bǎo)護(hù)基(jī)團，以及鹼(jiǎn)基的保(bǎo)護基團基(jī)（苯(běn)甲酰基和異丁基(jī)）被去(qù)除(chú)，從而形(xíng)成了天然的(dí)DNA結構(gòu)。然而，必要(yào)的去保(bǎo)護(hù)步驟完(wán)成(chéng)後，寡核苷(gān)酸(suān)混合物還包含(hán)幾(jī)種必(bì)須(xū)被(bèi)去除(chú)的小分(fēn)子(zǐ)有(yǒu)機化合(hé)物。

所有非(fēi)必(bì)須(xū)有(yǒu)機化(huà)合(hé)物(wù)被移(yí)除的過(guò)程通(tōng)常叫(jiào)做脫(tuō)鹽。脫鹽(yán)純(chún)化可以借助(zhù)反向矽(guī)膠柱(zhù)進(jìn)行。盡管脫(tuō)鹽(yán)純(chún)化可以移除(chú)所(suǒ)有的非必須有機雜(zá)質，但它(tā)不能(néng)有(yǒu)效移除(chú)合(hé)成中產(chǎn)生微量的提(tí)前(qián)終(zhōng)止(zhǐ)的(dí)寡(guǎ)核(hé)苷酸雜鏈(liàn)。然而，脫鹽(yán)的寡核(hé)苷酸還是能夠滿足ＰＣＲ檢(jiǎn)測等基礎(chǔ)生物(wù)研(yán)究。

二，BioRP / OPC純化(huà)

如果(guǒ)寡核(hé)苷酸(suān)以(yǐ)“三苯甲基"的(dí)形式(shì)合成(chéng)，則N-甲基寡核(hé)苷酸(suān)包含(hán)5’-DMT基(jī)團，提(tí)前(qián)終(zhōng)止的寡(guǎ)核(hé)苷酸不包含該(gāi)基團。因為DMT基有強(qiáng)的親(qīn)脂(zhī)的特(tè)性，有(yǒu)5’-DMT基團的寡核苷酸與反相樹脂有(yǒu)親和(hé)性，因(yīn)此反(fǎn)相親和(hé)樹脂通(tōng)常(cháng)被用(yòng)於寡核苷酸(suān)的(dí)純化。利(lì)用(yòng)反(fǎn)向樹(shù)脂和5’－DMT寡核苷酸(suān)存(cún)在強親和力(lì)，但是(shì)提(tí)前(qián)終(zhōng)止的寡(guǎ)核(hé)苷(gān)酸不(bù)包含DMT基(jī)團(tuán)，所(suǒ)以，我們能夠(gòu)成功的把(bǎ)想要(yào)的N-甲(jiǎ)基寡核苷酸從提(tí)前(qián)終(zhōng)止(zhǐ)的寡核苷酸(suān)雜(zá)質中分離出(chū)來。

三(sān)，HPLC

如果合成的寡核(hé)苷(gān)酸(suān)應(yīng)用(yòng)於(yú)克隆，定向誘(yòu)變或定量的基因探(tàn)測(cè)，那(nà)麼(mó)對(duì)其純度(dù)要求較(jiào)高。脫鹽(yán)或OPC純化的(dí)寡核苷(gān)酸可(kě)能(néng)達(dá)不到(dào)要求(qiú)，則HPLC純化被廣(guǎng)泛(fàn)地用於這個目(mù)的(dí)。作為一(yī)種(zhǒng)純化(huà)樹脂，陰(yīn)離子(zǐ)交換樹脂(zhī)或(huò)反(fǎn)向樹(shù)脂被(bèi)用(yòng)於寡(guǎ)核(hé)苷酸純(chún)化(huà)。陰(yīn)離(lí)子交(jiāo)換樹脂的HPLC通常(cháng)顯(xiǎn)示95-98%純化效率，對(duì)於達到(dào)35-mer寡核苷酸的(dí)純化(huà)是(shì)充分的。反(fǎn)向樹脂(zhī)化(huà)的HPLC與陰(yīn)離(lí)子交(jiāo)換樹(shù)脂的HPLC呈現(xiàn)相(xiāng)似(sì)的純化效率。因(yīn)為HPLC的純(chún)化(huà)效(xiào)率很大(dà)程度(dù)依(yī)靠寡核(hé)苷(gān)酸的長度(dù)，用HPLC法不(bù)能有(yǒu)效純(chún)化長的(dí)寡核苷(gān)酸(suān)（大(dà)於35-mer)。

四，PAGE

對於長(cháng)的(dí)寡核(hé)苷酸的純(chún)化（50-100mer），我(wǒ)們推薦PAGE純(chún)化(huà)法(fǎ)，它使用交(jiāo)連的聚丙(bǐng)烯(xī)酰胺凝膠(電泳(yǒng))作為(wéi)純(chún)化基質(zhì)。盡管PAGE顯(xiǎn)示(shì)出高的純(chún)化(huà)效(xiào)率(shuài)（＞98%），但它在(zài)額外(wài)的(dí)步驟方(fāng)麵有一些(xiē)缺(quē)陷，比(bǐ)如在(zài)PAGE之後(hòu)需(xū)要提(tí)取和(hé)脫鹽，繼而將(jiāng)導致純化(huà)產(chǎn)率的下降。

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